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α-硫辛酸经PI3K/Akt和Nrf2诱导氧化应激下人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶-1中文摘要目的观察α-硫辛酸（alphalipoicacid，ALA）对外源性H2O2对人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶（Hemeoxygenase，HO）-1的影响，并探讨其分子机制。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19，并根据不同的实验目的分为6 组：（1）空白对照组：仅给予等体积培养基；（2）H2O2干预组：ARPE-19细胞中加入终浓度为12.5mol/LH2O2作用30min；（3）ALA干预组：H2O2作用后加入10～30μmol/LALA作用4～24h；（4）PI3K抑制剂组：在组3基础上加入25μmol/LLY294002作用30min；（5）siRNA干预组：采用特异性siRNA干扰Nrf2或HO-1 表达，随后根部不同研究目的加入H2O2和（或）ALA；（6）CoPP 或ZnPP干预组：在组3基础上加入10μmol/LCoPP或ZnPP作用3h。RT-PCR 和Western blot 分别检测HO-1 mRNA和蛋白表达；流式细胞术检测ARPE-19 细胞凋亡；荧光探针检测活性氧（reactiveoxygen species，ROS）的产生；Western blot 检测Akt 磷酸化及Nrf核转位。结果1.RT-PCR结果显示，阴性对照组HO-1 mRNA 和蛋白表达水平极低，12.5mol/L H2O2处理30min后，HO-1 仅有轻微增高。不同浓度ALA孵育后，随着ALA 剂量的增加，HO-1 表达逐渐增多；2.H2O2作用ARPE-19细胞30min后，磷酸化Akt水平仅轻微增加。10～30μmol/L ALA作用4h 后，磷酸化Akt 水平随着ALA浓度的增高而增加；23.阴性对照组ARPE-19 细胞无Nrf2发生核转位。30μmol/LALA作用后，细胞核内Nrf2含量显著增高。而同时给予25μmol/LPI3K 抑制剂LY294002 处理后，细胞核内Nrf2明显降低；4.采用siRNA干扰Nrf2表达后，与对照siRNA组相比，HO-1 表达显著降低。5.H2O2 处理可明显诱导ARPE-19 细胞凋亡，并诱导其产生ROS。同时给予30μmol/LALA 处理后，细胞凋亡率和ROS 分泌显著降低。ALA干预的同时给予HO-1抑制剂ZnPP处理后，细胞凋亡率和ROS上升至H2O2组水平；siRNA干扰HO-1表达后，细胞凋亡率、ROS水平与ZnPP处理组类似。而ALA联合HO-1 激动剂CoPP处理，能进一步降低细胞凋亡率及ROS 产生。结论ALA可能通过PI3K/Akt和Nrf2途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO-1，从而发挥对细胞的保护作用。关键词α-硫辛酸；视网膜色素上皮细胞；血红素氧合酶-1基金项目：国家自然科学基金3Alphalipoic acid protectsretinalpigment epithelialcellsagainst oxidativestressviainductionof heme oxygenase-1expression via PI3K/Akt and Nrf2pathwaysAbstractObjectiveToobservetheeffectandmolecularmechanismofalphalipopicacid(ALA)tothe exogenousH2O2onproductionofHemeoxygenase(HO)-1inhumanretinal pigment epithelium cellsMethodsHumanretinalpigmentepitheliumcellsARPE-19wasculturedinvitroandwas dividedinto6groupsaccordingtodifferentexperimentalpurposes:(1)Controlgroup (0.1%medium);(2) H2O2group(ARPE-19cellswereaddedby12.5mmol/LH2O2for 30min;(3)ALAinterventiongroup(Cellsweretreatedwith10~30μmol/LALAfor 4~24hafterH2O2administration;(4)PI3Kinhibitorgroup(Cellswereincubatedwith 25μmol/LLY294002for30minafterALAtreatment);(5)siRNAgroup(Cellswere transfectedwithspecificsiRNAforNrf2orHO