白藜芦醇对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的干预分析word论文.docxVIP

白藜芦醇对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的干预研究研究生：王志娣导师：杨波副教授中文摘要目的观察白藜芦醇对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的干预作用。方法体外培养肾小管上皮细胞系HK-2。实验分为正常对照组、顺铂组和不同浓度白藜芦醇干预组。用乳酸脱氢酶释放实验检测不同浓度顺铂（0μg/mL、3.125μg/mL、6.25μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL）对HK-2细胞的毒性作用，同时检测12.5μg/mL 顺铂联合不同浓度白藜芦醇（0mmol/L、0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L）对HK-2 细胞的最大作用浓度。观察顺铂（12.5μg/mL）或顺铂和不同浓度白藜芦醇（0.01mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L）处理前后N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-Acetyl-?-D-Glucosaminidase，NAG）的改变情况；MTT法观察细胞的生长增殖情况；用Hoechst染色法观察细胞的形态学改变，AnnexinV-FITC/PI流式细胞术分析HK-2 细胞凋亡的情况。结果1.乳酸脱氢酶释放实验显示，0～12.5μg/mL顺铂对HK-2细胞LDH（Lactate dehydrogenase，乳酸脱氢酶）漏出率无明显影响（P0.05）。12.5μg/mL顺铂联合不同浓度白藜芦醇共孵育HK-2细胞24h，0～0.1mmol/L 白藜芦醇对HK-2细胞的LDH漏出率无明显影响（P0.05），联合0.5mmol/L白藜芦醇对HK-2 细胞的LDH漏出率显著升高（P0.05）。2.MTT结果显示，12.5μg/mL顺铂对HK-2 细胞的吸光度值有明显抑制作用，较正常对照组差异有统计学意义（P0.01）。经不同浓度白藜芦醇处理后，HK-2 细胞的吸光度值随着白藜芦醇浓度的增加而上升（P0.05）。3.12.5μg/mL顺铂作用于HK-2 细胞后，NAG浓度显著高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），而白藜芦醇处理能显著降低顺铂诱导HK-2细胞释放2NAG（P0.05）。4.Hoechst染色结果显示，顺铂处理的HK-2细胞，出现明显的凋亡小体，说明其能引起HK-2细胞的凋亡。而白藜芦醇能在一定程度上抑制HK-2细胞的凋亡（P0.01）。5.AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，顺铂能明显诱导HK-2 细胞凋亡（P0.01）。白藜芦醇处理后，凋亡率显著下降（P0.01），并呈一定的剂量依赖性（P0.05）。结论白藜芦醇能在一定程度上呈时间与剂量依赖性抑制顺铂诱导HK-2的凋亡，从而对肾小管上皮细胞发挥一定的保护作用。关键词白藜芦醇；顺铂；肾小管上皮细胞；凋亡3Intervention of resveratrolonapoptosis in renal tubular epithelial cell inducedby cisplatinAbstractObjective:Thisstudyisfocusedontheinterventionofresveratrolon apoptosis induced bycisplatin in renal tubularepithelial cells.Methods: StrainHK-2ofrenaltubularepithelialcellwaspropagatedin vitro.Theexperiments included thenormal control group、cisplatin exposuregroup and various concentration resveratrol treatment group. The cisplatin-mediatedcytotoxiceffectsonHK-2weredeterminedbyLactatedehydrogenaserelease experiments. At the sametime, thelevel ofNAGwas detectedboth beforeandafter cisplatinorcisplatinaddedwithvariousconcentrationsofresveratroltreatment. CellproliferationwasmonitoredthroughMTTanalysis.Morphologicalchangesof cellswereassessedbyHoechststaining.AndtheapoptosisinHK-2cellswere analyzed byAnnexinV-FITC/PIflowcytometry.Results:Lactatedehydrogenas