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一株利用木糖产乙醇酵母菌的发酵条件的优化 　　摘要：以实验室保藏的一株发酵木糖产乙醇能力较强的酵母菌为研究对象，利用响应面法对其发酵条件进行了优化。最适发酵条件为温度３０．０ 、ｐＨ ６．０、接种量１５．００％、静置发酵２４ ｈ，理论获得培养基中乙醇含量为１．４４７ ｇ／Ｌ。 　　关键词：木糖；酵母；乙醇；响应面法 　　中图分类号：Ｘ１７２；ＴＫ６ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11419－4038-03 　　 　　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ A Ｙｅａｓｔ Ｓｔｒａｉｎ Ｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇ Ｘｙｌｏｓｅ 　　ｔｏ Ｅｔｈａｎｏｌ 　　 　　ＺＨＡＮＧ Ｙｉｎｇ－ｌｏｎｇ１，２，ＪＩ Ｘｉａｎｇ１，2，ＣＡＩ Ｌｕ１，2 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎ ｔｈａｔ ｃｏｕｌｄ ｆｅｒｍｅｎｔ ｘｙｌｏｓｅ ｔｏ ｅｔｈａｎｏｌ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｆ ｉｎｏｃｕｌｕｍ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ １５．００％， ｐＨ ６．０， ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ２４ ｈ ａｔ ３０．０ ， ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ １．４４７ ｇ／Ｌ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｘｙｌｏｓｅ； ｙｅａｓｔ； ｅｔｈａｎｏｌ； ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄ 　　 　　发展可再生能源，特别是生物能源是解决能源危机的重要手段，其中燃料乙醇由于其成熟的生产应用技术和丰富的原料来源成为世界各国首选的生物能源。燃料乙醇的生产原料中，木质纤维原料因其最为丰富和廉价而引起了广泛的关注。木质纤维原料中半纤维素约占２０％～４０％［１－３］，８５％～９０％的半纤维素水解产物是木糖［４］，所以木糖的乙醇发酵被视为植物纤维原料生物转化生产乙醇的关键［５］。以实验室保藏的一株发酵木糖产乙醇能力较强的酵母菌为实验对象，对其发酵条件进行了优化，以期为该菌株在木质纤维素燃料乙醇生产工艺中的应用奠定基础。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　实验用酵母菌为内蒙古科技大学生物工程与技术研究所筛选。 　　１．２方法 　　１．２．１菌种发酵时间的确定将菌种种子液５ ｍＬ接入装液量为５０ ｍＬ的木糖发酵培养基［５０ ｇ／Ｌ木糖＋１０ ｇ／Ｌ２ＳＯ４＋２ ｇ／Ｌ酵母粉＋２ ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４ ＋１ ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ４］ 的２５０ ｍＬ三角瓶中，３５ 、７０ ｒ／ｍｉｎ摇床培养，培养时间分别为２４、４８、７２ ｈ，反应结束后测定培养基中乙醇含量、木糖残余量和木糖转化率，确定其最佳发酵时间。 　　１．２．２菌种发酵的厌氧好氧实验［6-8］将种子液１０ ｍＬ接入装液量为１００ ｍＬ的木糖发酵培养基的２５０ ｍＬ三角瓶中，在３５ 分别静置和７０ ｒ／ｍｉｎ摇床培养４８ ｈ，反应结束后测定培养基中乙醇含量、木糖残余量及木糖转化率，分析发酵特性。 　　１．２．３目标菌种发酵条件响应面优化根据１．２．１与１．２．２的实验结果，采用ｄｅｓｉｇｎ－ｅｘｐｅｒｔ软件，以温度、ｐＨ、接种量为自变量，发酵后培养基中乙醇含量为响应值，设计３因素３水平响应面实验。 　　 　　 　　１．２．４指标测定乙醇含量：采用重铬酸钾氧化分光光度法测定［9］；木糖残余量：采用３，５－二硝基水杨酸法测定［10］；木糖转化率＝乙醇产量／［培养基中初始木糖量－木糖残余量］×１００％。 　　２结果与分析 　　２．１菌种发酵时间研究 　　培养基中乙醇含量随发酵时间的延长先逐步上升，在４８ ｈ时达到峰值，之后随时间的延长而下降，可能是发酵产物被菌株消耗引起的；木糖含量随时间的延长呈下降趋势，可见菌株在７２ ｈ内一直在对木糖进行利用；木糖转化率随发酵时间的延长下降，可见菌株随着发酵的进行会消耗产物，导致木糖转化率下降，从转化效率来看发酵时间以２４ ｈ为宜。 　　２．２菌种发酵的厌氧好氧实验 　　对目标菌株进行厌氧好氧实验，结果表明，静置发酵２４ ｈ后，培养基中乙醇含量为１．１４７ ｇ／Ｌ，木糖转化率为６６．３％，７０ ｒ／ｍｉｎ摇床发酵２４ ｈ，培养基中乙醇含量为１．０７６ ｇ／Ｌ，木糖转化率为４８．６％。可见与７０ ｒ／ｍｉｎ摇床发酵相比，静置发酵乙醇产量和木糖的转化率都更高。 　　２．３目标菌种发酵条件响应面优化结果 　　在５０ ｍＬ种子培养基，静置发酵２４ ｈ的条件下进行响