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精液常规检测的标准化方法探讨 北京医院检验科 单战海 根据世界卫生组织(WHO) [1、2]调查1万对不育夫妇中可能男性导致不育的因素占33%,女性不育的因素占25%,双方共同因素占20%,双方找不到原因者占15%。换句话说，不育因男方的原因占55%以上。在排除了男性的精索静脉曲张、睾丸的异常、精道阻塞、生殖系炎症、内分泌及染色体异常等疾病后，精液常规检查成了判断男性是否具有生育能力的唯一指标，所以正确的实验室诊断非常重要。 在我国90%以上的实验室精液常规的检查是普通显微镜的直接镜检法,这种方法人为的因素差别很大，不同的实验室及同一实验室不同的人在镜检同一标本时都会有不同的结论。轻者给临床造成了误诊，重者给患者造成了巨大的经济或精神损失。下面是我实验室去年接受地方医院的一些特殊病例研究结果： 材料和方法 一、标本来源 1．患者a (顶体蛋白缺少患者）：精子活动率95%、畸形精子2%、精子计数180 x 109/L、半小时液化。 2. 患者b (精原细胞的误诊）：白细胞满视野/Hp、偶见精子。病人称已用过多种抗生素治疗均未见效。 3．患者c (长尾精子的误诊)：精子活动率98%、畸形精子3%、精子计数210*109/L、半小时液化。 二、标本的收集 根据传统的精液检查方法,采取手淫法留取标本,将标本留入灭菌干燥容器内,在30分钟内送到化验室并注意保温.留取每个病人禁欲3--5天后的精液做为实验组。在留取病人标本的当日,同时约定已生育过的25岁—35岁正常男性10人，留取精液为对照组。 三、研究方法 1．普通图片镜检法 患者a组：待精液液化后涂片在高倍镜下把视野调暗观察,发现精子的头部略圆. 涌动速度较慢.于是做如下实验. 将生育组10人（1号—10号），即对照组与患者1的精液同时涂片，盖上盖玻片放在阴凉处，待精子自然死亡而盖玻片内的精液又未完全干涸时，每人随机测量100个精子，用目镜测微器测量精子的大小。根据文献[6]判定标准如下，正常精子头部呈卵圆形，长约3~5μm ,宽2~3μm,中段(体部)7~8μm。尾部伸长45μm。头部前2/3处为顶体。测量结果见表1。 患者b组： Clermont(1963年)认为，在光镜下可区分三种精源细胞，即A型（Ad为黑色型，Ap为灰色型）和B型。根据核的构造可分：1）黑色型（Ad）：具有圆盘状的核，其中有浓染的染色物质何中心形成空泡。泡浆呈PAS阳性，核呈嗜碱性；2）灰（浅）色型（Ap）：具卵圆形或椭圆盘状的核，着色浅，染色颗粒和1-2个核膜相连，具核小体。胞浆PAS阴性； 3）B型：具有球形的核，有粗大的浓染颗粒。待精液液化后,在高倍镜下观察,注意把视野调暗。白细胞的判定标准是细胞中呈均匀的点状，而精源细胞除点状结构外还有其他结构，同样我们将实验组与对照组的10份精液标本(一….十)在同一条件下用高倍镜将每份标本测定30个视野(A1…A30)，结果见表5与表6. 患者c组：待精液液化后涂片，发现精子的泳动速度较慢，原地打转者居多。待精精子自然死亡后，用目镜测微器测量精子的大小，根据文献，正常精子头部呈卵圆形，长约3~5μm ,宽2~3μm,中段(体部)7~8μm。尾部伸长45μm。同样我将对照组10份精液标本（一….十）与实验组在同一条件下测定，每个标本我们选定30个精子(A1…A30)进行检测，测定统计结果见表9。 2．瑞氏—吉氏染色法 患者a组：待精液液化后,依血片推片法,将精液推成薄片,吹干后放95%乙醇中固定1小时,取出吹干,用瑞氏—吉氏染色液(瑞氏染液与吉氏染液10:1混合)，在加等量的蒸馏水，混匀染色20分钟，染色后用自来水冲片，把染片置于95%乙醇中浸2—5秒，脱掉片膜上的浮色，干燥后用光学树脂封片，置油镜下镜检， 在片膜的尾部计数100个精子，根据文献精子头部前2/3处为顶体，呈浅红色，核位于顶体基部呈紫红色，核内可见空泡。尾部呈紫红色。用目镜测微器测量精子的大小，结果发现头部呈圆形,尾部略长。同样我将对照组10份精液标本（1号—10号）与实验组在同一条件下测定，每个标本随机测量100个精子，测量结果见表2。 患者b组：待精液液化后，用瑞氏—吉氏染色法进行相同的检测[9], 我们将实验组与对照组的10份精液标本(一….十)在同一条件下用高倍镜将每份标本测定30个视野(A1…A30)，结果见表5与表6. 患者c组：待精液液化后，用瑞氏-吉氏染液处理标本，用目镜测微器测量精子的大小，测量结果发现，精子的尾部变化较大，整个精子的形态偏长。我们将对照组与试验组按上述方法测定，统计结果见表9。 3．过氧化酶染色法