真菌感染与实验室诊断进展李若瑜演示文稿.pptVIP

系统性真菌病—危及生命 临床常见的条件性真菌感染 临床常见的条件性真菌感染 念珠菌病: 最常见，血源感染的第4位。 曲霉菌病: 常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。 隐球菌病: 艾滋病人患病率为10-20%。 接合菌病（毛霉病）:多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。 临床有增多趋势的条件性真菌 非白念念珠菌感染 毛孢子菌感染 地霉感染 镰刀菌感染 枝顶孢霉感染 暗色真菌感染 马尔尼菲青霉 真菌感染的诊断方法 真菌感染的诊断方法 真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学 真菌感染的实验诊断方法及问题 显微镜检查-阳性率？ 培养-时间？敏感性？意义？ 血清学-敏感性？特异性？ 分子生物学-标准化？ 阿申蓝染色 HE PAS 组织学特点 Immunochemistry 皮肤隐球菌病的组织病理学 菌丝 孢子 曲霉病的 组织病理学 Prof. Richardd Calderone’s lecture-2006, Beijing 念珠菌病-直接镜检 隐球菌病—直接镜检 曲霉病—— 曲霉头 曲霉病 双分支菌丝 曲霉病——直接镜检 双分支菌丝 曲霉头 接合菌（毛霉）病—直接镜检 粗大无分隔菌丝 各种培养法— 念珠菌显色培养基CHROMagar Candida 生理学试验—碳源同化 API 20 C AUX试剂盒 ID32C 酵母鉴定系统 霉菌的鉴定——两种简易的可代替小培养的制片方法 孢子发生（conidiogenesis） 真菌感染的非培养诊断 真菌感染的诊断存在问题 直接镜检-阳性率？ 培养检查-时间？敏感性？意义？ 血清学-敏感性？特异性？ 分子生物学-标准化？ PCR PCR, galactomannan 1-3-?-D-glucan, PCR 种特异性 属特异性 真菌通用 真菌感染的非培养诊断方法 真菌细胞壁可供诊断检测的标记 Mannan 1-3-beta-D-glucan 非培养诊断检测方法 G试验检测b-1,3 –D-葡聚糖 ELISA法检测曲霉抗原 乳胶凝集试验检测新生隐球菌抗原 ELISA法检测念珠菌抗原 PCR_真菌通用引物、种属特异性引物 方法：G试验 β-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 - b-1,3-D-葡聚糖通过激活G因子（ Factor G）引起凝集； 内毒素通过激活C因子（Factor C）引起凝集； 试剂盒: 祛除Factor C ?葡聚糖特异 β -1,3-D-葡聚糖检测方法 两种试剂盒 Fungitec-G (marketed in Japan) Obayashi, Lancet 345:17-20, ’95 “确诊真菌感染的患者”: 90% sensitive Glucatell (approaching US licensure) Ostrosky 多中心研究 189 侵袭性真菌感染高危的患者* 每名患者取材1次: Sensitivity: 70%; Specificity 87%. β-1,3-D-葡聚糖 检测范围 不仅可检测念珠菌感染 曲霉、镰刀菌 和很多霉菌均存在β-1,3葡聚糖( Miyazaki, J Clin Micro 33:3115, ‘95) 隐球菌细胞壁为alpha-葡聚糖,故为阴性 阳性结果只能代表存在侵袭性真菌感染,不能确定种类 假阳性: 纱布，某些血液透析的滤过器等 Clin Infect Dis 2004;39:199-205 侵袭性真菌感染中葡聚糖检测 AML, MDS Receiving antifungal prophylaxis Cut off 60 pg/ml Clin Infect Dis 2004;39:199-205. 30 30 with candidemia control subjects 侵袭性真菌感染的葡聚糖检测 Fungitell? assay 真菌感染与实验室诊断进展 真菌感染与实验室诊断进展 北京大学第一医院 北京大学真菌和真菌病研究中心 李若瑜 真菌感染的流行特点 免疫受损 宿主防御部 细胞生长抑制剂 使用抗菌素 静脉插管 微生物 条件致病菌 嗨 Bud! 嗨 伙计! 机会来了！ 念珠菌 曲霉菌 条件致病真菌感染危险因素 国外： 血液系统肿瘤病人 —粒细胞减少、 __骨髓移植