水产动物疾病学大实验讲义 - 上海海洋大学“水产科学实验教学中心”.pdfVIP

水产动物疾病学 大实验讲义 （嗜水气单胞菌的人工感染和分离 以及疾病的常规检查和诊断） 陆宏达、张庆华编 上海海洋大学水产与生命学院动物医学系 2009．5 0 一、嗜水气单胞菌的人工感染及分离大实验 （一）概况 主要淡水养殖鱼类暴发性流行病是我国养鱼史上危害鱼的种类最多、危害鱼的 年龄范围最大、流行地区最广、流行季节最长、危害养鱼水域类别最多、造成的损 失最大的一种急性传染病。临床症状表现为全身出血，是典型的败血症病变。嗜水 气单胞菌（Aeromonas hydrophlia , Ah)是该病的主要病原之一。 嗜水气单胞菌为革兰氏阴性短杆菌，有运动力，氧化酶阴性，发酵葡萄糖产酸 产气，对新生霉素或弧菌抑制剂 0/129 不敏感，过氧化氢（接触）酶阴性，兼性厌 氧，4~10 ℃下能生长，30℃左右生长繁殖最快，43 ℃不生长；pH 值 5.5~10 生长； DNA 的 G+C mol%为 58.3 ％；有的具有强烈的β－溶血性；有的产“HEC毒素， 即溶血性（hemolytic activity) 、肠毒素毒性（enterotoxigenicity ）以及细胞毒性 (cytotoxicity)三个英文词的第一个字母。 （二）目的要求 通过对嗜水气单胞菌的人工感染及分离实验课的学习，了解致病菌的培养和稀 释、人工感染方法、观察疾病的发生和发展过程、掌握无菌操作条件下进行致病菌 分离的程序、观察致病菌的分离结果、熟悉菌落形态特征以及培养特点。对结果进 行分析、比较，总结出致病菌人工感染及分离的特点。 （三）实验材料 嗜水气单胞菌菌株纯培养物、水族箱、气泵、控温仪、实验用鲫鱼（100g 左 右）、温度计、饵料、捞网、普通营养琼脂平板、无菌蒸馏水、无菌生理盐水（0.85% 的NaCI 溶液）、吸管、灭菌试管、记号笔、一次性注射器、玻璃注射器、针头、解 剖盘、解剖剪、解剖刀、剪刀、镊子、纱布、酒精棉球、洁净的玻片、光学显微镜、 蒸馏水、三角烧瓶、天平、称量纸、药匙、接种环、麦氏比浊管。 （四）实验内容及操作程序 1．致病菌的培养和实验前的准备工作 1） 实验鱼的驯养： （1）实验材料： 1 养鱼的塑料箱，异育银鲫，控温加温箱，冲气泵，气管，气头，温度表。 （2 ）实验方法： 实验用的健康异育银鲫，在加网罩的塑料箱中驯养约一个星期，充气 增 O2 ，在驯养期间水温逐渐升高，每天温度升高2~4 ℃左右，最终温度达 28 ℃左右，及时吸污和换水，保持水质清新。 2 ） 致病菌（嗜水气单胞菌）的扩大培养 （1） 实验材料： 营养琼脂培养基斜面（每组 2 支），接种环（1 支），嗜水气单胞菌斜 面菌种（1 支）。 （2 ） 实验方法： 按微生物实验方法把菌种接种到营养琼脂培养基斜面上，放在 28 ℃培 养箱中培养 24 小时后备用。 3 ） 营养琼脂培养基平板 （1） 实验材料： 灭菌空培养皿（每组 4 支），100ml 量筒（1 只），天平（1 台），营养 琼脂培养基，称量纸，搅拌玻璃棒 （2 ） 实验方法： 配制 200ml 营养琼脂培养基。称取 8.2 克营养琼脂培养基（或按照说 明书上的要求进行配制），倒入三角烧瓶中，加入量筒量取的 200ml 蒸馏 水，用玻璃棒搅拌溶解后（或通过适当加温进行溶解），用棉塞塞住三角 烧瓶，将培养基置高压灭菌锅内，121℃灭菌 15～30min，培