大气颗粒物PM10对小鼠泪膜功能和角膜上皮组织结构的影响.DOCVIP

大气颗粒物PM10对小鼠泪膜功能和角 膜上皮组织结构的影响 奎婿谭鈕吴安花拯追晨吐董王亚虹那毅 陕西省西安市第四医院眼科南华大学第一附属医院 眼科厦门大学眼科研宄所南昌大学第一附属医院 : 目的研究大气颗粒物PM1｛）对小鼠泪膜功能和角膜上皮组织结构的影响。方法24 只雄性6s周龄BALB/c小鼠，随机分为A、B组，每组12只。空白对照组6只不 作处理。B组采用5 mg/ml PMlQ点眼，A组采用无菌PBS点眼，3次/d。分别在 干预前及干预第1、4和7天进行实验小鼠泪膜功能相关检查，包括采用酚红棉 线法检查泪液分泌量、泪膜破裂时间（BUT）、荧光素染色及荧光素染色评分 （FL）。根据分组于相应时间点收集苏角膜组织，行苏木精-伊红染色及透射电子 显微镜下观察角膜上皮组织结构变化。结果干预4和7 d后，A组泪液分泌量、 BUT、FL较干预前无明显变化（P〉0.05），而B组泪液分泌量减少、BUT、FL较 干预前恶化（P0. 05）。点眼7d后，A组上皮细胞为（5±1）层，B组为（7±1） 层，差异有统计学意义（P0. 05）。电镜观察可见A组角膜上皮微绒毛呈指状突 起，微绒毛数量多，排列整齐;而B组角膜上皮微绒毛减少、变短、排列紊乱。 结论PM。会影响小鼠泪膜功能，小鼠泪液量分泌减少，泪膜稳定性K降;小鼠角 膜上皮组织结构损坏。 关键词： PM10;泪膜功能;角膜上皮; 越来越多的流行病学和 临床证据表明，污染物使人群各种疾病的患病率增加Ill。大气颗粒物 （particular matter, PM）是不同大小和化学特征的液体和固体材料的混合物， 括释放到空气中的灰尘、污垢、烟尘、吸烟及液滴等。颗粒物依据其动力学直 径，将空气动力学直径SlOti m的固体颗粒物称为PM1b主要由含碳物质、有机 质、元素碳的总和、有机物组成M。PM。主要来源于人为燃烧、排放等过程。 因为PM1D是FI前雾鎭的主要成分，可能对人体健康产生负而影响，因此对PHLW 监测和研宄很重要。眼球作为机体的一个重要器官，眼表直接暴露于外界。本研 宄旨在探宄PMk/滴眼液对正常小鼠泪膜功能和角膜上皮组织结构的影响，为临 床防治提供?-定的理论基础。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1实验动物 选取30只BALB/c雄性小鼠（18~22g,西安交通大学医学院实验动物中心），为 无特定病原体级实验动物（SPF级动物）。使用裂隙灯显微镜及眼底镜检查眼前 节、眼底无异常。30只小鼠置于标准环境:室温（25±1）C,湿度（60±10）%, 12 h昼/夜循环照明（8 : 00~20 : 00）位1。所有小鼠都给予和同的水量和食物。 木研宄所涉及的研宄方法均遵循《赫尔辛基宣言》，动物实验符合视觉与眼科协 会规定的对动物眼科和视觉研究的使用，同时获得西安交通大学医学院动物伦 理委员会批准m。 1.1.2主要试剂及仪器 TH-16A 4通道大气颗粒物智能采样仪（武汉天虹仪表有限责任公司），聚四氟 乙烯滤膜（美国Whatman公司），酚红棉线（天津晶明医用器材公司），荧光素 钠（广州白云山明兴制药有限公司）。H-7650透射电子显微镜（德国HHACHT 公司），裂隙灯显微镜（苏州66视觉科技股份有限公司），游标卡尺（上海仪 器一厂）o 1.2方法 1.2. 1 PM:。混悬液的制备 （1） PM10的采集:PM:。由西安环境监测站提供（2015年10月1日-2015年10月31 日，于四安市某超级站采用智能采样仪，切割粒径为10pm，采用聚四氟乙烯 滤膜进行采样。采样时间为当天10 : 30至次日8 : 30, 22 h/d连续采样）。将 载有PM。的聚四氟乙烯滤膜裁剪为1.0 cmX 1.0 cm，浸入蒸馏水中，超声振荡 45 min/次，共3次，用6层纱布滤过，真空下冷冻干燥、称重，4C冰箱保存备 用；（2） PM*。混悬液的制备:使用前,PMkj稀释于无菌的PBS中,浓度为5mg/ml, 用超声漩涡处理。加入保存剂苯扎溴铵，其浓度控制在0. 005%，4°C冰箱保存备 用O 1.2.2实验分组 24只雄性6?8周龄BALB/c小鼠，随机分为A、B两组，每组12只，均为右眼。 A组采用PBS点眼，B组采用5mg/ml PM10混悬液点眼，3次/d，空白对照组6 只不点眼，作为正常对照组。分别在干预前及干预后1、4和7 d各时间检测并 观察实验小鼠的泪液分泌量、泪膜破裂时间（break-up time, BUT）、荧光素染 色（fluorescein stain test, FL）及其评分。干预7 d后，行角膜苏木精-伊 红染色（hematoxyl in-eosin staining, HR）观察小鼠角膜上皮情况，以及透射 电子显微镜下观察小鼠角膜上皮组织超微结构变化下的