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 实验原理 微核 （Micronucleus）：染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。 嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。 实验目的 1、了解微核发生的机制； 2、掌握微核实验的一般程序和实践意义； 3、掌握对实验动物进行药物处理的一般程序； 4、掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力。 仪器和器械 生物显微镜、解剖剪、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、塑料吸瓶、吸水纸等。 试剂及配制 （1）小牛血清（灭活） 将滤菌的小牛血清置于56℃恒温水浴保温30min灭活。灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室里。 （2） 姬姆萨（Giemsa）染液 成分：Giemsa染料 3.8g、 甲醇 375mL、 甘油 125mL。 配制：将染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375mL和甘油，混合均匀，放置37℃恒温箱中保温48h。保温期间，振摇数次，促使染料的充分溶解，取出过滤，两周后用。 染毒途径和方式 染毒途径视实验目的而定，常用腹腔注射，24小时取材。 试验方法 （1）骨髓的制取 ①用断颈法处死小鼠。用剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去股骨的髋面，将吸有0.85% Nacl生理等渗液小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞。反复吹打使其混合均匀，制成细胞悬液。 ②将细胞悬液在1000转/分离心5分钟，弃除上清液。 （2） 涂片 在离心管中加入少量的小牛血清（约0.3ml)混匀后，按血常规涂片法涂片，长度约2cm ~3cm (涂片时一次涂成）。在空气中晾干。 （3） 固定 将干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。即使当日不染色，也应固定后保存。 （4） 染色 将固定过的涂片放入Giemsa应用液中，染色20min ~30min，然后立即用0.1mol/L磷酸盐缓冲液冲洗。 （5） 封片 用滤纸及时擦干染片背面的水滴，再用双层滤纸轻轻按压染片，以吸附染片上残留的水分，再在空气中晃动数次，以促其尽快晾干，然后放入二甲苯中透明5min，取出滴上适量光学树脂胶，盖上盖玻片，写好标签。 观察与计数 先用低倍镜，后用高倍镜粗略检查，选择细胞分布均匀，细胞无损，着色适当的区域，再在油浸镜下计数。虽然不计数含微核的有核细胞，但需用有核细胞形态染色完好做好判断制片优劣的标准。 选择细胞完整、分散均匀，着色适当的区域，在油镜下观察。以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准。 本法系观察嗜多染红细胞的微核。用Giemsa染色法，嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈粉红色。典型的微核多为单个的、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色，直径通常为红细胞的1/20～1/5。 每只动物计数1000个嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，微核率以千分率表示。 数据处理　　利用统计学软件SPSS的单因素方差分析或 t 检验等方法，进行数据处理，分析实验结果（如后表）。 　　 写出完整的实验报告 试验报告应包括以下内容： （1） 受试物名称、配制方法、所用溶剂； （2） 动物种属和品系、体重、数量、性别、来源； （3）剂量分组，染毒途径和方式； （4）试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法，结果判定标准； （5）结果：以列表方式报告受试物对动物骨髓细胞微核发生率； （6）结论。 要求参阅的文献： [1]孟紫强，阮爱东，桑楠等.SO2污染对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的诱发作用.环境科学，2002，23（4）123-125. [2]孟紫强，桑楠，张波等.二氧化硫体内衍生物诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的效应.环境科学学报，2000，20（2）239-243. [3]耿德贵，王秀琴，刘士旺等.除草剂使它隆对黄鳝细胞的致突变作用研究.环境与健