[医学]分析化学紫外可见光光谱法一章的教学课件2.pptVIP

第二节 基本原理 一、Lamber-Beer定律 二、吸光系数 三、偏离Beer定律的因素 四、透光率的测量误差 一、Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律 描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系 假设一束平行单色光通过一个吸光物体 Lambert-Beer定律 续前 取物体中一极薄层 续前 讨论： 1．Lamber-Beer定律的适用条件（前提） 入射光为单色光 溶液是稀溶液 2．该定律适用于固体、液体和气体样品 3．在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定 二、吸光系数 1．吸光系数的物理意义： 单位浓度、单位厚度的吸光度 续前 2．吸光系数两种表示法： 1）摩尔吸光系数ε (EM)。 ： 在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分含量吸光系数 / 比吸光系数： 在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系 氯霉素的水溶液在278 nm处有吸收峰，设用纯品配制100ml含2.00mg 的溶液以1cm 比色池于278nm处测得透光率T=24.3% 求：其百分吸光系数及其摩尔吸光系数？（Mr=323.15） 三、偏离Beer定律的因素 依据Beer定律，A与C关系应为 经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素表现为 以下两个方面 （一）光学因素 （二）化学因素 （一）光学因素 1．非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度 续前 续前 讨论： 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 结论： 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） 选λmax作为测定波长（ΔE↓，S↑且成线性） 续前 2．杂散光的影响： 杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度 范围内，与所选波长相距较远 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值 3．反射光和散色光的影响： 反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形 注：一般可用空白对比校正消除 4．非平行光的影响： 使光程↑，A↑，吸收光谱变形 （二）化学因素 偏离Beer定律的因素：化学因素（图） 四、透光率的测量误差——ΔT 续前 五、吸光度测量的条件选择： 1）测量波长的选择： 2）吸光度读数范围的选择： 3）参比溶液(空白溶液)的选择： .第三节 紫外分光光度计 紫外-可见分光光度计的主要部件 1．光源： 2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 续前 3．吸收池： 玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英——不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致） 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 5．记录装置：讯号处理和显示系统 1．单光束分光光度计： 特点： 使用时来回拉动吸收池 →移动误差 比色池配对 国产722、751型、XG-125型、英国SP500型和伯克曼DU-8型等。 续前 2．双光束分光光度计： 特点： 不用拉动吸收池，可以减小移动误差 可以自动扫描吸收光谱 国产710型、730型、740型、日立UV-340型 续前 3．双波长分光光度计 特点： 利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 习题 下化合物中，可用紫外可见分光光度法直接测定含量的是（ ） A 乙醇 B 正庚烷 C 环己烷 D 苯甲醛 E 甲烷 光量子的能量正比于辐射的 （ ） A 频率 B 波长 C 波数 D 传播速度 E 周期 下面五种化合物中， 跃迁所需能量最大者是（ ） A 1，4戊二烯 B 1，3丁二烯 C 1，3环己二烯 D 1，3，5己三烯 某溶液符合朗伯－比尔定律，稀释之后，其紫外可见光谱的吸收峰将（ ）。 A.向短波方向移动 B.不移动，但峰高值增大 C.向长波方向移动 D.　不移动，但峰高值减小 E. 峰的位置和峰高值都不变 某溶液符合Lambert-Beer 定律，若只改变入射光波长则（ ）发生改变。 A.吸光度 B. 百分吸光系