第1章分子生物物理2核酸结构和功能zy.ppt

1.2.1 Chemical Component 1.2.2 Nucleotide 1.2.3 Space configuration 1.2.4 Properties 1.2.1 Chemical Component C、H、O、N、P 组成有两个特点 一· 核酸一般不含硫元素 二· 磷元素的含量比较固定9%~10% 1.2.2 Nucleotide 核苷酸是核酸的基本单位 Base AT CG Expression 字符式 5’ pApCpTpG 3’ 5’ pApCpUpG 3’ 5’ ACTGCTAG 3’ 线条式 Primary Structure 碱基序列：四种核苷酸按照一定的排列顺序，通过磷酸二脂键连接形成的多核苷酸 作用力：磷酸二脂键 Secondary Structure 双螺旋结构 作用力：氢键 Double Helix Structure 1. DNA分子是由两条方向相反的平行多核苷酸链构成，两条链的主链都是右手螺旋，螺旋表面有大沟和小沟； 2. 碱基均在主链内侧，A与T配对，G与C配对，“半保留复制” 3. 成对碱基处于同一平面，与螺旋轴垂直，双螺旋每转1周有10个碱基对，螺距为3.4nm； 大多数天然DNA属双链DNA； 双链DNA分子较硬，呈比较伸展的结构。 Tertialry Structure 双链DNA多数为线形分子，但有些为双链环状DNA（dcDNA） 超螺旋(Supecoil) 松弛环形DNA 解链环形DNA 负超螺旋 生物体内绝大多数螺旋DNA以负超螺旋形式存在；真核细胞染色质和一些病毒的DNA是双螺旋线形分子，双螺旋DNA盘绕组蛋白形成核小体。 RNA 大多数天然的RNA分子是以一条单链形式存在的。但在生理条件下，RNA分子也可以形成双螺旋区，发卡式结构，茎-环结构等二级结构（下图）。这样的结构一般都出现在tRNA和rRNA分子中。RNA的双螺旋区的结构类似于A-DNA的结构。 Classification of RNA rRNA：核糖体的组成成分，细胞内最丰富的一类RNA，（80％）； mRNA：最不稳定的一类RNA ，载有来自DNA的信息，在核糖体中，作为模板指导蛋白质的合成（3％）； tRNA：在蛋白质生物合成的过程中，转运氨基酸到核糖体-mRNA复合物的相应位置（15%）。 tRNA 1.2.4 Properties of nucleic acid 一般性质 核酸的紫外吸收性质 核酸的变性和复性 核酸的沉降特性 一般性质 核酸的紫外吸收性质 核酸中的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭大π键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值，其吸光率用A260表示。 核酸的变性 指核酸的双螺旋区的氢键断裂、变成单链的无规则线团，使核酸的某些光学性质和流体力学性质发生改变，有时部分或全部生物活性丧失，并不涉及共价键 的断裂。 增色效应：DNA变性后，由于双螺旋解体，碱基堆积已不存在，藏于螺旋内部的碱基暴露出来，使得变性后的DNA在260nm紫外光的吸收率比变性前明显升高。 引起核酸变性的因素很多，如加热、极端pH、有机溶剂、尿素等。由温度升高引起的变性称热变性。 DNA变性的特点是爆发式。DNA变性温度，溶解温度Tm。 DNA变性温度Tm相关因素 DNA的均一性，越高温度越低。 G-C含量，越高Tm越高，正比关系 介质中离子强度，一般离子强度较低，溶解温度则较低，溶解温度的范围较宽。 复性 变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构的过程。 许多理化性质得到恢复，生物活性也可得到部分恢复。 反应与许多因素有关。如热变性DNA缓慢冷却时，可以复性，称为退火，骤冷则反而不能复性。在一定条件下，复性反应速度可用Cot曲线表示。与基因组大小及重复性均有关。 减色效应 核酸的沉降特性 不同构象的核酸（线形、开环、超螺旋结构）、蛋白质及其他杂质在超离心机的强大引力场中，沉降速率有很大差异。 离心法纯化、分离核酸，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 RNA分离常用蔗糖梯度，DNA则常用氯化铯梯度，应用溴化乙锭-氯化铯密度梯度平衡超离心，很容易将不同构象的DNA、RNA及蛋白质分开。 核酸结构和功能 *解放军306医院实验科 病理科 *联合基因 1.2 Nucleic Acid 核苷酸 核酸 磷酸 核苷 戊糖（pentose) 碱基（base） （nucleotide） （nucleoside） Purines Pyrimidines adenine guanine cyto