[高等教育]第八章 核酸的理化性质 - 复制.pptVIP

用于鉴定DNA的Southern印迹技术 用于鉴定RNA的Northern印迹技术 原位杂交技术 基因芯片技术等 以分子杂交为基础的分子生物学技术 Northern blot：用于检测RNA Western blot：用于检测蛋白质 上：探针标记 右：放射自显影 菌落的原位杂交 （一）核酸的提取 1.核酸提取的原则 五 核酸的研究方法 ?? ? 尽可能保持其天然状态，防止降解和变性。 ?? ? 条件温和，防止过酸、过碱、剧烈搅拌。 ?? ? 抑制核酸酶。 2.DNA分离纯化 真核DNA以核蛋白（DNP）形式存在，DNP溶于水或 高盐溶液（ 1mol/L NaCl ） ， 但不溶于低盐溶0.14mol/L NaCl），据此，采用高盐提取，低盐沉淀，可将DNP与 RNA核蛋白分开，提取出DNP。 DNP可用水饱和酚抽提，去除蛋白质。还可用氯仿-异戊醇去除蛋白质。 水相中的DNA可被0.3M NaAC-70%乙醇沉淀。 3.RNA的制备 RNase 的灭活： 玻璃器皿：140-200 ℃，8小时； 塑料器皿：0.1%DEPC，37 ℃ （RT）过夜 提取液加盐酸胍或异硫氰酸胍 反应体系中加RNasin等特异的RNase抑制剂 mRNA的提取 磁珠吸附法 紫外吸收法： 定磷法：在浓H2SO4作用下将有机P转化成无