[医药卫生]20101115表观遗传学培训.pptVIP

表观遗传学Epigenetics 研究意义 疾病的研究 表观遗传学的分子机制 DNA甲基化 RNA干扰 组蛋白修饰 染色质改型 (ChIP\RIP\端粒\端粒酶) 什么是DNA甲基化 研究得最清楚、也是最重要的表观遗传修饰形式。主要是基因组DNA上的胞嘧啶第5位碳原子和甲基间的共价结合，胞嘧啶由此被修饰为5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5-mC) DNA甲基化 发生时间： DNA复制之后、转录之前 主要形式 DNA甲基化的功能 是细胞开闭基因表达的一种方式，基因表达水 平与其甲基化水平呈负相关。 例如： DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则可能使基因过度表达，进而引起肿瘤或癌症的发生。如促肿瘤生长因子IGF2基因过度表达会引发大肠癌。 DNA甲基化检测方法 甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR, MSP） DNA甲基化分析检测试剂 亚硫酸氢钠通用修饰试剂盒 甲基化与非甲基化的基因组对照 DNA甲基化分析检测试剂盒 特定基因扩增试剂盒 CpG Wiz Kits针对各种特定基因而设计，使检测针对性强，灵敏度高（仅需1ng的DNA），省去了设计、合成引物的时间。 有针对以下20种特定基因的试剂盒：APC、BRCA1、DAP Kinase、E-cadherin、ERα、Fragile X、 GST-pi、HIN、hMLH1、 MGMT、p14/ARF、p15、p16、Prader Willi/Angelman、PARβ2、 RASSF1A、Rb1、SOCS1/ASC、TMS1/ASC、VHL。每套试剂里有特定基因的甲基化和非甲基化的扩增引物，同时含有甲基化与非甲基化的全基因组对照样品，与亚硫酸氢钠通用试剂盒配合使用。 RNA干扰（RNA interference, RNAi） 定义： 正常生物体内抑制特定基因表达的一种机制，由双链RNA（dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。 应用： 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。 RNA干扰（RNA interference, RNAi） 引起RNAi的分子: siRNA、miRNA siRNA转染试剂 组蛋白修饰 组蛋白修饰 地位 基因正常表达除了需要相应转录因子的诱导和启动子区处于低甲基化状态外，还需要具备另外一个表观遗传学条件，即组蛋白修饰处于激活状态 修饰类型 组蛋白乙酰化（Acetylation） 组蛋白乙酰化（Acetylation）分析 组蛋白磷酸化(Histone phosphorylation)分析 组蛋白甲基化（Histone Methylation） 组蛋白甲基化（Histone Methylation） 组蛋白泛素化(Ubiquitinization) 组蛋白SUMO化修饰(Sumoylation) SUMO化修饰 是一个由多种酶共同参与调控的级联酶促反应过程(类似泛素化修饰)，参与蛋白的核转运，基因转录，细胞凋亡，蛋白稳定，应激反应，和细胞周期等，但不直接介导蛋白的降解。 组蛋白瓜氨酸化（Citrullination） 染色体免疫沉淀（ChIP） Chromatin Immunoprecipitation： 是体内分析DNA-蛋白质相互关系的技术，能够完整、真实的反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的最好方法。 意义： 判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰 研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系 检测体内反式因子与DNA的动态作用 ChIP流程 ChIP涉及的试剂 ChIP Kits ChIP Abs ChIP—Protein A or G? ChIP—Agarose vs. Magnetic Beads? RNA结合蛋白免疫沉淀分析(RIP) 定义： RIP是分析体内RNA-蛋白质相互关系的技术，能够真实反映体内mRNA转录后表达调控的情况 研究领域： RNA与肿瘤、艾滋病、白血病、糖尿病、畸形等多种病变密切相关，对RNA（miRNA）的研究越来越热 RIP试剂盒 RIPAb+ 抗体引物套装 RBP (RNA Binding Protein)抗