2.形态学检测PPT.ppt

微生物 形态学检验;样本;细菌的形态学检查是细菌检验的重要方法之一。 细菌的形态学检查可用于细菌的分类与鉴定，并为进一步作生化反应、血清学鉴定提供依据。 细菌的形态学检查可迅速了解标本中有无细菌及大致的菌量并可根据其形态、结构和染色性初步确定其种属，对及时治疗疾病有一定参考意义。 细菌的形态学检查还看根据形态特征对少数细菌作出初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和脑脊髓液中的脑膜炎奈瑟菌等； 细菌的形态学检查还可验证培养物是否为纯种。; 显微镜是由两组会聚透镜组成的光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜（object lens），而焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜（ocular lens）。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二级放大， 得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。;;光学显微镜的基本结构; 双目显微镜(binocular microscope)的结构是利用一组复合棱镜把透过物镜后的光束分成强度相同的两束而形成两个中间像，分别再由左右目镜放大。来自物镜的光线经棱镜组分光成两束平行光束，进入目镜，双目显微镜必须满足分光后两束光的光程必须相同和两束光的光强度大小一致这两个基本要求。;目镜与物镜的比较;荧光显微镜 是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，产生能观察到各种颜色荧光的一种光学显微镜。利用它可研究荧光物质在组织和细胞内的分布。为防止紫外线进入物镜，可以采用暗视场照明。 细胞中的某些物质（如叶绿素）经紫外线照射后能发出可见光线，称为荧光。 自发荧光：由细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光。 诱发荧光：一些细胞成分本身经紫外线照射后不发荧光，但用荧光染料（酸性品红、甲基绿、吖叮橙等荧光色素）进行活体染色或固定后切片染色，就能在荧光镜下看见荧光，这种荧光叫诱发荧光。 ;荧 光 显 微 镜 的 种 类;荧 光 显 微 镜 的 主 要 部 件;透 射 荧 光 显 微 镜 的 构 造;落 射 荧 光 显 微 镜 的 构 造;倒置显微镜(Inverted Microscope)的组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。;;激光扫描共聚焦显微镜;;激光扫描共聚焦显微镜工作原理;;抑制图像的模糊，获得清晰的图像 具有更高的轴向分辨率，并可获取连续光学切片 增加侧向分辨率 由于点对点扫描去除了杂散光的影响; 细胞的三维重建 细胞定量荧光测定 ?细胞内钙离子、pH值和其它离子的动态分析 ?细胞间通讯和膜的流动性 ;光镜分辨极限为0.2?m，小于0.2?m的微细结构的光波可产生衍射现象,这种光波经过物体时可绕过物体就象无物体经过一样,因此无法用光镜观察。这就需要一种更大分辫力的仪器来观察比0.2?m更小的物体的微细结构。 电子显微镜由电子光学系统（照明系统、成像系统）、真空系统、供电系统、机械系统和观察显示系统组成。;照明系统主要由电子枪和聚光镜组成。 电子枪是发射电子的照明光源，其作用是形成电子束，并控制电子束的发射，获得一高亮度和高稳定度的照明电子光源。常用的电子枪由常用的是热阴极三极电子枪，它由发夹形钨丝阴极、栅极帽和阳极组成。 聚光镜是把电子枪发射出来的电子会聚而成的交叉点进一步会聚后照射到样品上。 照明系统的作用就是提供一束亮度高、照明孔径角小、平行度好、束流稳定的照明源。;;聚光镜用来会聚电子枪射出的电子束，以最小的损失照明样品，调节照明强度、孔径角和束斑大小。一般都采用双聚光镜系统。第一聚光镜是强激磁透镜，束斑缩小率为10～50倍左右，将电子枪第一交叉点束斑缩小为1～5μm；而第二聚光镜是弱激磁透镜，适焦时放大倍数为2倍左右。结果在样品平面上可获得2～10μm的照明电子束斑。;电子透镜：能使电子束聚焦的装置 电子透镜是电镜的核心部件，其工作方式是利用复杂的电极和线圈结构形成静电场和磁场。 电子透镜存在各种像差（aberration），这是影响成像质量的主要因素。 ;电 磁 透 镜 的 结 构;真空系统主要由机械泵、油扩散泵或离子泵、联动控制阀门、真空排气管道、空气过滤器和用于真空度指示的真空测量规等组成。 供电系统包括高压电源、真空系统供电电源、透镜电源、辅助电源及安全保护系统的电源等。 机械系统包括电镜座、标本室、磁屏蔽外壳、镜筒、制冷系统及控制工作台等，这些部分都有着相当高的性能。 ; 观察显示系统由荧光屏和照相室两部分组成。 电镜通过显像管的荧光屏把电子所成的像转换成光学影像后供肉眼观察。 电子感光板是常用的记录手段之一，可以利用照相机在照相室内拍照。;透射电镜（Transmission ele