[航空航天]毕赤酵母高效电转化条件的研究.pdfVIP

中国海洋药物杂志 20 10 年 4 月第 29 卷第 2 期 Chi n J M ar D rugs , 2 010 A p ri l , Vol . 29 N o. 2 ·研究报告 · 毕赤酵母高效电转化条件的研究Δ 高炳淼 ,唐天乐 ,长孙东亭 ,罗素兰 (热带生物资源教育部重点实验室 ,海南大学园艺园林学院 ,海南大学海洋学院 , 海南大学生物技术实验中心 ,海南 海口 570228) 摘 　要 : 目的 建立毕赤酵母的高效电转化方法 ,为利用毕赤酵母重组表达海洋药物功能基因提供方法基础 。 方法 采用电穿孔的方法把外源 DN A 转化进毕赤酵母基因组中。通过对毕赤酵母生长状态 , 电击条件等影 响因素进行探索 。结果 当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞 、电压为 1. 5kV 、质粒浓度为 0 . 15g · L - 1 和 0 . 2cm 电转化杯时 ,转化效率达到最大值 ,为每微克质粒 DNA 36 个转化子 。经抽样 PCR 鉴定所得到 的转化子均为阳性克隆 。结论 通过对电转化各种条件的优化 ,获得了高效电转化技术方法 。 关键词 :毕赤酵母 ; 电转化 ;转化率 ( ) 中图分类号 :R965 . 2 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :1002346 1 20 10 02000 105 Conditions of high eff icient electroporation transf ormation of Pichi a p ast or is GA O Bingmiao , TAN G Tianle ,ZHAN GSUN Dongtin g , L U O Sulan ( Key L aboratory of T rop ical B iol og ical R es ou rces of M i nis t ry of E d ucat ion , H ort ic ul t u re Ga r den Col leg e , Ocean Col leg e , Cente r f or E x p eri m ent al B iotech nol og y , ) H ai nan Uni ve rs i ty , H ai k ou 570228 , Ch i na Abstract : Objective A high efficient met ho d of elect roporation t ran sfor matio n wa s e st abli shed to p rovide t he ba si s for exp re ssing t he f unctional gene s of marine dr ugs in P ichi a p as toris . Methods The me