(精选)【医学课件大全】诊断酶学全套课件 (精品 165p)教学课件.ppt

泸医附院检验科 吴泽才;;酶的临床应用简史;本章主要内容;有关概念;酶学基础知识;一、酶的分子结构与功能;（一）、酶的分子组成;NAD+、NADP+;（二）、酶的活性中心;;;;二、酶促反应的特点与机理;（一）酶促反应的特点;;高度的特异性;;酶促反应的可调节性;（二）、酶促反应的机理;;2、酶促反应的机理;三、酶促反应动力学;（一）、酶促反应; [S] [P] K2[E][S] Vmax[S] V = —— = —— = ———— = ——— dt dt Km + [S] Km + [S] 具体推导过程见生物化学教材 Vmax：最大反应速率 [S]：底物浓度 Km： 米氏常数 V：不同[S]时的反应速度;（二）、Km与Vmax;Km的意义;Vmax的意义;Km与Vmax的测定 1 Km + [S] Km 1 1 — = ———— = —— — + —— V Vmax[S] Vmax [S] Vmax 以1/V为纵坐标，1/[S]为横坐标作图可得一直线。纵轴截距为1/ Vmax，斜率为Km/Vmax，横轴截距为-1/ Km。;（三）、酶促反应的影响因素及反应条件的选择; 此为临床化学利用酶作为工具测定各种代谢物如Glu、UA、TG等的方法学基础。;;V=Vmax=K2[E]，反应速率与酶浓度成正比。酶学测定时应给予充分的底物浓度。;[S]/Km;2、酶浓度;3、缓冲液的种类、离子强度和pH;4、温度;5、激活剂与抑制剂;;;;三、酶的命名、分类与编号;;血清酶;一、血清酶的来源;二、去路;酶;酶;三、变化的病理机制;酶合成异常;酶释放增加;细胞内外酶浓度的差异 组织相同酶不同，内外差异不同；酶相同组织不同，差异也不同。细胞内外酶浓度相差越悬殊，血中升高的幅度可能就越大，如LD，肝内差异是3000倍，红细胞中是200倍。有人计算过，只要有1/1000肝细胞坏死，所释放的酶可使血中部分酶浓度增加一倍。轻度溶血，也可使血清中LD大幅度上升。;酶的相对分子量 释出速度与分子量成反比，分子量越小，血中升高的时间可能越早。如AMI时，CK（分子量85000）最先升高，而LD（分子量125000）明显推迟。;酶的组织分布 组织中含量越丰富，血流越丰富，胞内酶进入血流的可能性越大。由于无组织特异性，大多数血清酶不能特异地反映某个特定组织的病变。;酶在细胞内的定位和存在形式 线粒体酶与胞??酶比较，不易从细胞中释出，病变较轻时往往血清中浓度较胞质酶低，病变较重时可能升高幅度较大。如ALT大量存在于胞质中，而AST则在线粒体中较多。急性肝炎时，由于病变较轻，血中ALT超过AST；而在肝硬化时，主要病变为肝细胞坏死，往往AST大于ALT。有些酶与结构蛋白结合，或以多酶复合物的形式存在，较难从胞内释出。;酶排出异常;四、生理差异;性别 CK、ALP、γ-GT有性别差异，男性高于女性。CK肌肉组织含量高，雌激素抑制γ-GT合成，男性酗酒。;年龄 ALP在新生儿、婴幼儿、儿童、少年、青少年阶段均较成人水平高。CK、LD也有类似情况。;进食 高脂、高糖饮食可使ALP升高，酗酒可使γ-GT升高。;运动 激烈运动 CK、LD、AST、ALD、ALT均可升高。;妊娠 胎盘分泌，耐热ALP、LD、LAP（亮氨酸氨基转肽酶）、ALT均有不同程度的升高。 其他 某些酶或同工酶有种族差异。如G6PD。美国黑人、犹太人、白人、黄种人有差异。 ;酶的定量技术;一般化学测定的原理 A=KC，而酶的测定 ;一、监测方法;量气法;比色法和分光光度法;分光光度法 50年代起取代比色法。优点有三：一是测定范围扩大，可达红外和紫外；二是不需停止反应；三是不作标准管或标准曲线。Eg：反应系统可产生质子或电子（如脱氢酶催化的反应），可将NAD（P）+/NAD（P）H相互转化，利用二者吸收光谱差异可于340nm处监测底物的减少量或产物的生成量，从而推算出酶活性浓度。结合酶偶联技术，几乎可应用于各种血清酶的测定。缺点：需要精确带恒温装置的分光光度计。;荧光法和放射性核素法;其他方法;二、酶活性浓度的测定;时间;延迟时间;延滞期;零级反应期;一级反应期或非线性反应期;（二）、酶活性浓度测定方法;酶与底物作用一段时间，然后加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应的平均速度。 优点：简单，不需保温设备，显色剂的选择可不考虑对酶活