转染βG基因 HHCC细胞的裸鼠转移模型的复制.pdfVIP

中国兽医科技 第30卷 第6期 2000年 15 金昌德，施新猷，仇凯 (解放军第四军医大学实验动物研究中心．陕西西安7l0033) 流式细胞仪测定细胞周期，并采用裸鼠脾种植法研究转口G基因HHcc细胞的转移特性；接种后60d收集转移灶，常规 制片，HE染色镜检。结果，转染船基因HHCC细胞内多见颗粒性物质，微绒毛及突起增多，溶酶体增事，内质网厦棱 变，S期细胞增多(PO．05)，G期细胞减少(P0．05)；裸鼠脾神植后60d，发现试验组出现广泛转移，在肝，肾、肠 系膜淋巴结肉眼可见转移灶，而对照组但在肝细胞中有个别散在的瘤细胞。试验结果表明．转染BG基因可增强HHCC 细胞在裸鼠体内的转移能力。 关键词：人肝癌细胞株；p葡萄糖苷酸酶基因；裸鼠；动物模型 中图分类号：R73～37 文献标识码：A 文章编号2000)060015一03 癌细胞转移是恶性肿瘤的重要恶性表型之一，是大多数癌 离心，30mL／L戊二醛固定。按常规方法处理后进行超薄切片， 症患者死亡的原因。人体肿瘤裸鼠模型给癌症治疗及癌症机理 铅一铀染色．置jEM一2000型电镜观察。 研究创造了有利条件和实验工具。人体肿瘤在操鼠体内转移需 1．4细胞周期测定 要浸润^淋巴管、血管附着、增殖等o]．因此其转移模型建立较 困难。目前．人体肿瘤裸鼠移植瘤转移模型研究主要通过恶性 涤，体积分数70％乙醇固定，吹打均匀。制成单细胞悬液(2× 肿瘤细胞的筛选和探索最佳转移途径以及政变宿主免疫状态和 io— 分子遗传调控等手段进行㈨]。肛葡萄糖苷酸酶(pGlucuroni—didc，I’I)染液(碘化锭15 2mg，Tritonxloo100肛l，， mg，RNase dase，口G)在黑色素瘤等恶性肿瘤细胞转移过程中有较高的表 柠檬酸钠100mg，生理盐水65 1 达。为了探索pG基因对人肝癌细胞株(HHcc)在棵鼠体内转n1L，4℃放置30min．过筛后用流式细胞仪测定细胞周期。 移特性的影响．我们对HHcc和转染BG基因的人肝癌细胞株1．5动物试验 (HHcc-pG)的生物学特性进行比较，同时采用裸鼠脾种植法建 将lO只裸鼠随机分为实验组和对照组，每组5只。肿瘤接 立了转染pG基因HHcc细胞裸鼠转移模型。 种参考脾种植法的保留法进行Ⅲ；收集对数生长期的HHCc和 1材料和方法 个／mL。将试验裸鼠用20g／L戊巴妥钠(40 1．1试验动物 麻醉；腹部皮肤捎毒．在左侧腹中部作5mm长的切口，用大拇 BALB／c—nu／nu裸鼠，3～5周龄，雌雄兼用，由中国生物制 指轻压腹部，脐出脾，于脾上端进针缓慢注入瘤细胞悬液40 品鉴定所提供。试验和饲养均在sPF条件下的超净层流架中 肛I．；出针后用酒精浸湿的棉球压迫止血，然后将脾复位、关闭腹 进行，所用的饮水和饲料均经灭菌处理，让动物自由饮用、采食。 腔。试验裸鼠接种瘤细胞60d后将其处死，取出转移灶，用 1．2细胞培养 40mL／I，多聚甲醛固定，常规方法制作标本，HE染色镜检。 HHcc及HHCc_0G由本校病理教研室“863”课题组提 2 结果 供。口G基因是通过脂质体介导转染HHCC细胞．使HHCC细 胞已稳定表