《酶工程与蛋白质工程》PPT课件第4章.pptVIP

色氨酸吲哚基 * 酚基修饰 修饰酚基的主要方法有碘化法、硝化法和琥珀酰化法等。经酚基修饰剂修饰后，酶分子由于引入负电荷，因而增加了对带正电荷的底物的结合力，有利于酶催化功能的发挥。 * 六、分子内交联剂 用含有双功能团的化合物与酶分子内两个侧链基团反应，在分子内共价交联，可使酶分子空间构象更加稳定，从而也使酶的催化稳定性增加。 经过修饰的酶，其酶活力应保持或损失不多，同时应具有新的特性和功能。 化学修饰剂应是无毒并廉价易得的。 * 第五节 氨基酸置换修饰 将肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸，会引起酶蛋白空间构象的某些改变，从而改变酶的某些特性和功能，这种修饰方法，称为氨基酸置换修饰。 通过氨基酸置换修饰，可以提高酶活力或增加酶的稳定性，有利于酶的应用。 * 成功例证 酪氨酰-tRNA合成酶的第51位苏氨酸 (Thr-51)由脯氨酸置换，经修饰后的酶对ATP的亲和性提高近100倍，酶活力提高25倍。 * 氨基酸置换修饰的状况 早先，氨基酸置换修饰用化学方法进行。化学方法进行氨基酸置换，难度较大。 现在，蛋白质工程为氨基酸置换修饰提供了行之有效的手段。 * 第六节 基因突变酶修饰方法 20世纪80年代产生了蛋白质工程。 将需要改变的氨基酸通过基因定位突变，改变其结构基因的序列。 把酶分子修饰后的信息即突变后的结构基因贮存在DNA之中，经过基因克隆和表达获得具有新的特性和功能的酶。 给酶分子修饰展现了广阔的前景。 * 第七节 物 理 修 饰 定义：用物理方法，使酶分子的空间构象发生改变，改变酶的某些特性和功能的方法称。 特点：不改变酶的组分、基团和共价键，只是副键发生某些变化和重排。 * 成功例证 羧肽酶γ经高压处理后，有利于催化肽的合成而水解反应的能力降低。 先用盐酸胍等变性剂破坏胰蛋白酶原有构象，透析除去变性剂后，在不同温度下，使酶重新折叠形成新的构象。结果表明，50℃条件下重新构建构象的胰蛋白酶的稳定性比在20 ℃下（与天然胰蛋白酶的稳定性相同）重建构象的酶提高5倍。 * 酶分子修饰的应用 一、在酶学研究方面（1、酶的活性中心；2、酶的空间结构；3、酶的作用机制） 二、在医药研究方面（1、降低或消除抗原性；2、增强医药用酶的稳定性） 三、在工业方面（1、提高酶活力；增强稳定性；3、改变酶的动力学特性） * Chapter 4 Modification of Enzyme Molecule 第四章 酶的分子修饰 Contents of chapter 4 1、什么是酶分子修饰 2、酶分子修饰的基本要求和条件 3、酶分子的修饰方法（7种方法） Go Go Go Go 4、酶分子修饰的应用 * 4.1 什么是酶分子修饰？ 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。即：在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团，特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。 * 酶分子修饰的意义 酶的结构决定了酶的性质和功能。只要使酶的结构发生某些精细的改变，就有可能使酶的某些特性和功能随着改变。为以下目的对酶分子进行修饰 提高酶的活力 activity 增强酶的稳定性 stability 降低或消除酶的抗原性 immunological property 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 回本章目录 * 4.2 酶分子修饰的基本要求和条件 对酶分子进行修饰必须在修饰原理、修饰剂和反应条件的选择以及酶学性质等方面都要有足够的了解。 （1）酶的稳定性 热稳定性、酸碱稳定性、作用温度、pH、抑制剂等。 （2）酶活性中心的状况 活性中心基团、辅因子等。其他如分子大小、性状、亚基数等。 * 4.3 酶分子的修饰方法 金属离子置换修饰, 大分子结合修饰(共价/非共价) 肽链有限水解修饰 蛋白质侧链基团修饰 氨基酸置换修饰 基因突变酶修饰方法 酶分子的物理修饰 * 第一节 酶的金属离子置换修饰 把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方 法称为金属离子置换修饰。 用于酶分子修饰的金属离子，往往是二价金属离子。 金属离子置换修饰法只适用于本来在结构中含有金属离子的酶。 * 酶金属离子对酶的影响 从酶分子中除去其所含的金属离子，往往会丧失催化活性。 重新加入原有的金属离子，酶的催化活性可以恢复或者部分恢复。 用另一种金属离子进行置换，则可使酶呈现出不同的特性---使酶的活性降低甚至丧失；使酶的活力提高或者增加酶的稳定性。 * 离子置换修饰过程 加入一定量的EDTA等金属螯合物到酶液中，使酶分子中的金属离子与EDTA形成鳖合物，酶成为无活性状态。 通过透析等方法，将EDTA-金属螯合