pcr-str分型-湖北民族学院-昆明医科大学.ppt

许冰莹, Tel:0871Email:bingying_xu@126.com 昆明医科大学法医学院 一.扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymporphism, Amp-FLP） 采用PCR技术对模板DNA的等位基因进行特异性扩增， 通过电泳直接检测其扩增产物所呈现的长度多态性。目前用荧光标记引物对多个STR基因座扩增片段长 度多态性复合扩增检测方法，已成为对生物检材进行 个人识别和亲权鉴定的主要方法。 一.扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymporphism, Amp-FLP） 扩增片段长度多态性分析技术： （ Amp-FLP 分析技术）  PCR-VNTR PCR-STR 1.PCR-VNTR  （Variable number tandem repeats,VNTRs）  1.可变数目串联重复序列 重复单位长度：15-30bp 序列总长度： 100bp-20kb。 1.PCR-VNTR （Variable number tandem repeats,VNTRs）  PCR-VNTR 分型应用的局限性： （1）腐败、降解检材成功率低 （Corruption, degradation of samples with low success rate） Amp-FLP分析技术早期应用于小卫星VNTR基因座的分型。因为 TaqDNA聚合酶的链延伸能力限制，扩增片段长度多在2000bp 以下，但法医学实践中遇到的法医物证检材多受到外界环境 的影响，DNA变性、降解，不能获得完整的人类DNA模板，所 以不能有效地进行VNTR基因座的分型。 1.PCR-VNTR （Variable number tandem repeats,VNTRs）  PCR-VNTR 分型应用的局限性： 2.VNTR基因座的等位基因片段较大，不易扩增，检出率低。加上不同等位基因间片段长度相差较大，容易发生等位基因脱逸，将杂合子误判为纯合子。 1.PCR-VNTR（Variable number tandem repeats,VNTRs）   基本分型技术与PCR-STR相似，在法医学领域 目前已经没有应用了。 2.常染色体STR分型（Autosomal STR typing） 短串联重复序列（short tandem repeats，STRs）是目前在法医物证鉴定中应用最广泛的长度多态性遗传标记。 STRs：又叫微卫星DNA (microstatellite DNA) 重复单位长度 2-6bp，重复次数10-60次，序列总长度多在400bp以下。 2.常染色体STR分型（Autosomal STR typing） STR基因座的等位基因片段长度多在400bp以 下，扩增成功率高，阳性率和检测灵敏度比 VNTR基因座高出10倍，尤其适用于降解、陈旧 和腐败生物检材的分型。 3.电泳分离 Electrophoretic separation 二种方法： （1）聚丙烯凝胶电泳---垂直板电泳---银染系统 （Silver staining） （2）聚丙烯凝胶电泳---毛细管电泳---荧光标记自动检测系统（Fluorescence labeling automatic detection system） 荧光标记自动检测系统（Fluorescence labeling automatic detection system） 结果直观，常染色体基因座杂合子图谱显示 两个不同片段长度的峰，纯合子显示一个峰 ，每一个等位基因均按照重复单位的重复次 数命名。 （六）STR分型在法医学鉴定中的应用 High sensitivity---高灵敏度 High discriminating ability---高度鉴别能力 Standardization, automatic typing---标准化、自动化分型 （七）常染色体STR基因座 一个STR基因座能否用作法医DNA分析的遗传标记需要 用一系列指标进行评估，具体如下： 1.群体调查：群体遗传学参数，基因座各等位