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1（FA-1）mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达 畜牧与兽医2006年第38卷第11期 精子受精抗原-1(FA-1)mRNA在绵羊睾丸 和附睾中的表达 娜仁花,旭日干 (1.内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特010018; 2.哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室, 内蒙古大学生命科学学院实验动物研究中心.内蒙古呼和浩特010021) 摘要:本研究通过RT—PCR检测了该基因在绵羊睾丸和附睾中的表达情况.首先.提取绵羊睾丸组织,附睾头,体,尾部组织总RNA.以此为模 板,反转录合成eDNA,白行设计引物.PCR扩增出462bp的目的DNA.然后.将目的片断克隆入T载体.通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定 重组质粒中的目的DNA.再经序列分析鉴定目的片断.同时,以B.aetin为内参照物,进行RT—PCR半定量分析,比较精子受精抗原(FA?1)在睾 丸,附睾头,体,尾组织中的表达量.结果表明.FA一1在绵羊睾丸和附睾中均表达. 关键词:精子受精抗原.1;RT.PCR;T/A克隆;mRNA表达 中图分类号:S826.3文献标识码:A文章编号:0529-5l30(2006)l1-0o0l-03 Theexpressionofspermfertilizationantigen-1【FA-1)mRNAinthe testisandepididymisofram NARen.hua. XURi-gan2 (1.CollegeofAnimalScienceandMedicine,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Huhhot010018,China; 2.KeyLaboratoryofMammalReproductiveBiologyandBiotechnologyMinistryofEducation, TheResearchCenterforLaboratoryAnimalScienceofLifeScienceofCollege ofInnerMongoliaUniversity,Huhhot010021,China) Abstract:Spermfertilizationantigen一1playsacrucialroleinmammalianfertilizationanddevelopmentoffertilizedoocyte.Inthisstudy, totalRNAwaspreparedfromsheeptestisandepididymis.cDNAfragmentwasamplifiedbyRT—PCRusingspecificpfimem,andclonedinto pGM-TEasyvector.InsertedFA一1geneWassequenced.Meanwhile.semi—quantitativeanalysisofFA一1expressionintestisandcaput.COl- pus.caudaepididymisWascarriedoutbyRT—PCRbasedonB—actinasaninnercontro1.TheresultsindicatedthattheFA一1geneWasCX- pressedinbothtestisandepididymisofsheep. Keywords:spermfertilizationantigen一1;RT—PCR;T/Acloning;mRNAexpression 哺乳动物的精卵识别是相当复杂的过程.涉及到获能精子 膜和成熟卵细胞膜上的许多糖蛋白和糖基成分….FA一1为睾 丸特异性糖蛋白.是精子膜上的内在膜蛋白,主要于精子发生 的后期表达.它由Naz领导的研究小组首先发现,此蛋白与 受精密切相关,被命名为受精抗原一1(FA一1).在睾丸组织中, FA.1常以成熟形式,降解形式或糖基化修饰形式存在,在聚 丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)上可出现分子量完全不一致 的蛋白条带.FA一1已从人和鼠的精子中被分离和纯化. 收稿日期:2006—03.06 项目基金:国家自然科学基金和内蒙古自然科学基 金(200408020412)资助. 作者简介:娜仁花(1968一).女.蒙古族.副教授,博士研究生. 它也是组织特异性糖蛋白,人,鼠,兔,牛等动物种间的FA— l有高度同源性.这说明FA.1蛋白在哺乳动物中是存在的, 并具有其生理意义.为了进一步发现和研究FA—l蛋白在受精 和受精卵发育中的作用,本次试验利用RT—PCR技术,检测 FA.1mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达情况. l材料与方法 1.1试验动物及其组织 6只成年公羊屠宰后立即采集其睾丸和附睾组织,放人已 处理好的冻存