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to-Bac快速基因表达系统 2006;32(2)蚕业科学CANYEKEXUE183 利用细菌转座子构建适于家蚕的Bac-to-Bac快速基因表达系统 吴小锋曹翠平鲁兴萌 (浙江大学动物科学学院,杭州310029) 摘要为了较好地解决家蚕杆状病毒基因表达系统(BmNPVexpressionsystem)在重组病毒构建和纯化过程中存 在的重组率低,空斑分析技术繁琐,花费时间长等缺点,借鉴国外AcNPVBac—to—Bac快速基因表达系统工作原理, 对家蚕BmNPV基因组进行了改造.通过同源重组的方法,将含有单拷贝数细菌F复制子,插入有细菌转座子整合 靶住点,编码LacZa肽的部分DNA片段和抗性选择标记基因的基因片段重组入家蚕BmNPV基因组,替换多角体 蛋白基因,获得了家蚕BmNPV病毒穿梭载体BmBacmid;并利用供体质粒上的表达盆和细菌转座子以及细菌转座 子的基因定位转移作用,在细菌体内实现外源目的基因向家蚕BmNPV基因组上的转移整合,快速完成重组BraN— PV病毒的构建. 关键词家蚕;杆状病毒;细菌转座子;表达系统 中图分类号$881.2;Q78文献标识码A文章编号0257—4799(2006)O2一O183一O7 ConstructionofARapidBmNPV inSilkworm,Bomb Bac-to-BacSystemforApplication moriL.byUsingmor/LUSng_BacterialTransposon WUXiao—FengCAOCui--PingLUXing-Meng (CollegeofAnimalSciences,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029,Ch/na) AbstractInorderl0overcomesomedisadvantages0fBmNPVexpressionsystem.suchasIowrecombina— tionfrequency,laboriousplaqueassaysandlong-timetaking,anovelandrapidexpressionsystembasedon theprinciple0fAcNPVBac—to—Bacsystemwasconstructedinthisstudy.Thissystemcangeneraterecombi— nantbaculovirusgenomeinbacteriumthroughgenetranspositionbytransposon,andcanbeappliedinsilk— hisconstruction.alargeDNAfragmentcontainingtheIOW—copy—numbermini-Freplicon,akanamy— cinresistancemarker,andasegmentofDNAencodingthelacZapeptidewasinsertedintothelocusofpoly hedringeneofBmNPVgenomeThusobtainedrecombinantBmNPVgenomewasnamedasBmBacmid.To producetherecombinantBmNPV,theforeigngenewasfirstsubclonedintothedonorvectorwhichequipped withbacteriaItransposon.andsubsequentlytransposedtoBmBacmid.Bycolorselection,lherecombinanl BmBacmid.i.e.,therecombinantbaculovirusgenomewasrapidlyisolated,andthereaftertherecombinant baculoviruswaseasilygeneratedthroughfransfectionintoculturedcells. KeywordsBombyxmori;Baoulovirus:BacteriaItransposon;Expressionsystem 昆虫杆状病毒基因表达系统是表达重组蛋白的 有力工具.我们应用家蚕杆状病毒表达系统已 收稿日期:2006—02一l4 资助项目:国家重点基础研究发展计划973项目(编号~05CB121003); 农业部科技项目(编号20∞一C5);浙江省科技厅项目(编号 瑚640l5). 作者简介:吴小锋(1966一),男,浙江,副教授. Tel:057lE—mail:wuxiaofeng@.c 在家蚕体内成功表达生产了人FGF,人VEGF 等,并对该表达系统在扩大宿主