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荧光补偿 细胞分选 细胞的分选是通过流束形成含有细胞的带电液滴而实现的。在流动室的喷嘴上装备有一个超声振荡压晶体片，这个振荡装置使自喷嘴射出的液束破碎成千万个小滴，流动的细胞就被分散在这些小水滴中。这时给流束一个电脉冲信号，使小水滴就全部带上电荷。当带有不同电荷的细胞液流经一对带正、负几千伏恒定静电电场的偏转板时，带电的小水滴就根据自身所带的电荷性质产生偏转，落入各自的收集容器中，不带电荷的水滴就进入中间的废液容器中，从而实现了细胞的分选。  A leading supplier for multi-color assays for flow cytometry and reagents for immunological assays 流式细胞术的应用 淋巴细胞亚群分析 细 胞 凋 亡 细胞增殖 表面抗原的检测 流式科研应用 膜电位 其它 细胞凋亡 外源性途径:通过细胞外信号激活细胞内的凋亡酶Caspase 内源性途径:通过线粒体释放凋亡酶激活因子激活caspase 活化的caspase可以将细胞内重要的蛋白降解,引起细胞凋亡 检测方法 外源性启动信号包括受体的配体,如TNF-Fas Ligand ;跨膜蛋白Granzyme B 颗粒酶B;非蛋白激活物Ca2+ 射线 内源性信号反应性氧ROS可以特征性的引起细胞内损伤而诱发发生在线粒体膜上的凋亡 典型特征 1.线粒体膜电位的丧失 2.细胞膜PS磷脂酰丝氨酸的外翻 3.细胞核凝固缩和断裂 细胞膜检测方法 PS磷脂酰丝氨酸的外翻Annexin V fl-1 细胞膜的完整性 PI 7-AAD fl-3 细胞膜PS磷脂酰丝氨酸的外翻相关凋亡事件 细胞凋亡早期事件, PS暴露在细胞膜外,Annexin V 分子量35-36KD的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,与PS亲和力高Ka=10-10 ,Annexin V 被标记如FITC,PE.特点快,准确. Annexin V-FITC /PI双染可区分凋亡,坏死和正常细胞.凋亡细胞膜完整,坏死细胞膜破碎. PI可嵌人DNA的红色发光物质,不能通过完整的细胞膜,但是可以进入坏死细胞 Time Course of TRAIL Induce Jurkat Cell Apoptosis Dose Course of TRAIL Induce Jurkat Cell Apoptosis 细胞核相关凋亡检测 凋亡峰(DNA小片段峰)的检测DNA Ladder PI, 7-AAD TUNEL法 细胞周期 DNA含量 0 200 400 600 800 1000 PI 荧光强度(DNA含量) DNA含量分析(PI法) 2N 4N Counts G0/G1 G2/M S 异倍体 流式细胞术 曹林 当代生命科学热点 信号传导 研究技术: 二维电泳,流式细胞术,免疫荧光 流式细胞术 流式细胞术是对单细胞定量分析和分选的新技术。 激光 光学检测系统 信号 分析。 细胞从新生到死亡 从细胞膜到细胞浆和核内物质及染色体，探讨不同物质之间的关系。 细胞中测得多种参数(如DNA、RNA、蛋白质 和细胞体积等)，进行多信息分析。 细胞生物学和生物医学研究强而有力的手段。 流式细胞仪称作荧光激活细胞分选器（Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS） 能快速、精确地测量通过检测区液流中的各种粒子。 这些粒子可以是细胞、大分子、乳胶滴或其他粒子。 特点 测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞 可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理(大小)、化学特性(膜电位,钙流)的多参数测量，并具有明显的统计学意义 是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。 广泛应用 基础和临床医学研究，有效研究方法。 它在免疫学、肿瘤学、细胞遗传学、病理学、放射生物学等学科中已形成了独立的学科分支。 定量分析细胞表面和细胞内抗原，以及对细胞分子水平的核酸含量的测量，这些参数的定量变化已被用于确定正常和异常细胞的分化和生长，预示各种病理状态下细胞的生物行为。 发展史 1930?年?Caspersson?和Thorell?开始致力于细胞的计数1934?年?Moldaven?是世界上最早设想使细胞检测自动化的人他试图用光电仪记录流过一根毛细管的细胞1936?年?Caspersson?等引入显微光度术1940?年?Coons?提出用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白1947?年?Guclcer?运用层流和湍流原理研制烟雾微粒计数