名称大肠菌类的检测多管发酵法.docVIP

實驗名稱：大腸菌類的檢測─多管發酵法 實驗原理： 　　大腸桿菌意義為革蘭氏陰性菌，好氧或兼氣之無芽孢桿菌，能於攝氏３４～３７度Ｃ、４８小時內、分解乳糖產生酸和氣體。 　　多管發酵法是以統計的方法來進行推導，求出單位體積菌液大腸菌類數目之最大或然值，實驗結果以每１００ｍＬ水樣中大腸菌類的數目來表示 　　多管發酵法原理如下： 將假設均勻分布的含菌水樣進行等體積分割，可知再分割後每一小單位所含的菌數應該相同。 再繼續細分，小單位會出現有些單位有菌，有些單位不含菌的狀況。 當水樣體積分割太細時，若取樣數不多會造成菌數偏低。 由上述推論可知，倘若均勻取樣，分析其水樣體積中含菌與不含菌的比例，所得到的每單位平均菌數，經統計機率分配，即可準確的預測水中所含大腸菌類的數目。 　　 　　推定試驗： 　　推定試驗的目的是用來檢測水樣中，是否含有使乳糖發酵的大腸菌類。 　　取定量的水樣加入含有ＬＳＴ培養基的試管中，試管內含有收集微生物產生氣體的竇漢氏試管。水樣中若含有大腸菌類會以ＬＡＦ中的乳糖作為碳源產生氣體。是為陽性反應。至於其他無法利用乳糖的微生物則受抑制，無法生長，此外ＬＳＴ培養基中含有膽鹽作為表面張力抑制劑，可抑制大腸菌類以外的其他菌種生長。 實驗設備與材料： 　　所需用具：螺紋試管１６支、試管蓋１６個、安全吸球、量筒、燒杯數個、　　　　　　　　　　　　　　　竇漢氏試管１６個、玻棒、隔熱手套、取藥杓、秤藥紙 　　所需儀器：高溫高壓滅菌釜、恆溫培養箱、微量天平、電磁加熱攪拌器 　　 實驗步驟： 　　水樣來源：宿舍前的有涼亭池塘 配製二倍濃度培養液，每１０００ｍＬ蒸餾水加入７２ｇＬＳＴ培養基，此實驗所需１６支試管，每支１５ｍＬ，所以配置２５０ｍＬ的培養液，共需秤１８ｇ的ＬＳＴ培養基加上２５０ｍＬ蒸餾水配製。 將配置好的ＬＳＴ培養液分別裝入１６根試管，每根試管為１５ｍＬ，蓋上試管蓋（不蓋緊）。 將１６根試管拿去高溫高壓滅菌釜進行滅菌處理。 拿水樣做１０倍稀釋的動作，做３次１０倍稀釋，做到稀釋１０００倍為止。 將稀釋１０倍、稀釋１００倍、稀釋１０００倍的水樣，取每根１５ｍＬ加入５根試管，讓各稀釋濃度各有５根試管，第１６根試管則加入蒸餾水１５ｍＬ作為控制組。 在這１６根試管中，每根都放入竇漢氏試管。 最後，將這１６根試管放入約３７度Ｃ的恆溫培養箱，培養約２４小時再來觀察結果。 實驗結果： 　　 　 稀釋10倍 稀釋100倍 稀釋1000倍 試管１ O X X 試管２ O O X 試管３ O X X 試管４ X X X 試管５ O X X Ｏ：有產生氣體　　　　Ｘ：無產生氣體 　　經查表，陽性結果組合為４－１－０，每１００ｍＬ的ＭＰＮ為１７。 套入公式求得： 　　＝３.778(ＭＰＮ／１００ｍＬ) 問題與討論： 以大腸菌類作為水質污染指標的優點為何？目前我國飲用水水質標準中大腸菌類的規定限值為何？ 　　大腸菌類存在於溫血動物的消化道中，對人體或動物無害；大腸菌類比其他致病菌生存能力強，若水中無大腸菌類，則可判定也無其他致病菌；大腸菌類在環境中只會遞減不會遞增； 僅須少量水即可檢驗。 　　大腸桿菌的標準是5.1mpn/100cc這次的實驗讓我們這組一直出包，一開始取水樣，用了很多，結果需要的只有一點點，剛開始看到步驟，眼睛都花了，做起來果然不簡單，用了好多的試管，放在裡面的東西有夠臭的，全部裝完後，才發現做錯，又重做了一次，趕在時間內拿去滅菌，回頭想一想，如果沒做錯應該很快就能做完，不過過程還是很麻煩，一直在裝溶液，過了幾一天拿出來有幾支有菌，洗的時候，被臭味臭的快洗不下去了，還好最後有長菌。 　分數 　老師簽名 　1.多管發酵法 　 　 　2. 　 　 　3. 　 　 　4. 　 　 　5. 　 　 　6. 　 　 　7. 　 　 　8. 　 　 　9. 　 　 　10. 　 　 　11. 　 　 　12.