《生物制药技术 叶丽老师》发酵工程.pptVIP

生长曲线的说明 1、延迟期（lag phase): 细胞在新的营养环境中表现出来的适应阶段，菌体需要重新调整分子组成，包括酶和细胞结构成分，又称为调整期。 延迟期的存在会延长微生物正常的生长周期，设备的利用率低。 生长曲线的说明 2、对数生长期（log phase)**: 菌体高速生长；生长繁殖易受培养温度的影响；菌体大小、形态、生理特性一致； 生产中接种的种子。 3、稳定期（stationary): 细胞浓度达到最大值。 特征：菌体数处于动态平衡，细胞的分裂速率下降，代谢活动继续，可累积酶等代谢产物，并可合成次级代谢产物，该时期的长短与菌种和培养条件有关。 4、死亡期（death phase): 细胞大量死亡，并出现细胞自溶。 五、菌种保藏 原理：选用优良的纯种，最好是休眠体，创造一个使微生物代谢不活跃，生长繁殖受抑制，难以突变的环境条件。 环境要素**： 干燥；低温；缺氧；缺营养；添加保护剂 保藏方法 1、定期移植保藏：4oC冰箱保存，间隔一定时间重新移植 2、液体石蜡保藏： 3、沙土管保藏： 4、冷冻干燥保存（牛奶管） 5、液氮保存： 6、甘油保藏：10%-30%甘油 常用保藏方法 1.定期移植法 特点 简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类 常用保藏方法 2.矿油保藏法 矿油处理 灭菌：152kpa、30min去水：40~50℃烘至无色透明 无菌检验 注入种管 淹没斜面约1cm 口堵胶塞 用时转管再转管 常用保藏方法 3.麸皮法 基质的处理 麦粒浸透、煮熟麸皮拌湿 装管 灭菌 接种 培养 干燥器去水 麸皮保藏 常用保藏方法 4.冷冻真空干燥法 干燥 悬液 冻结 真空封口 常用保藏方法 5.液态氮超低温冻结法 优点：保藏效果好。 缺点：价格昂贵。 液氮温度可达-196℃。把菌悬液密封于安瓶中，置液氮罐内保藏。 常用菌种保藏方法的比较 保藏方法 措施 保存菌种 保藏期 备注 斜面保藏法 低温（4℃） 各类微生物 约1-6个月 简便，常用 斜面保藏（穿刺培养） 低温（4℃）、避氧 细菌、酵母菌 约6-12个月 简便 液体石蜡油保藏法 低温，阻氧 各大类 约1-2年 简便 甘油保藏法 低温 细菌、酵母菌 约10年 简便 沙土保藏法 干燥、无营养 产孢子的微生物 约1-10年 较简便、有效 冷冻干燥保藏法 干燥低温、无氧、有保护剂 各大类 大于5-10年 高效、繁琐 液氮保藏法 超低温、有保护剂 各大类 大于15年 高效、繁琐 * * 菌落的选出 从产物角度出发 在培养时以产物的形成有目的设计培养基； 利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素。 从形态的角度 菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别。 实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 采样（造纸厂） →80℃30min处理 文献:产生菌为中性芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌、放线菌及霉菌 0.0075%曲利本蓝＋1%CMC（羧甲基纤维素），pH10.5 培养3～4d，选择有凹陷圈的菌落 从285个土样中获得62株 26株为组成型 36株为诱导型 ↓ 菌种性能鉴定 包括菌株的 ： 毒性试验、 生物活性试验、 生产性能试验。 国外： ATCC；NBRC(IFO)；CBS；DSMZ 国内： CCCCM: 中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物: 中科院微生物所;武汉病毒所 医学微生物: 卫生部生物制品检定所; 中国医科院病毒所 抗生素菌种保藏管理中心: 中国医科院抗生素研究所; 四川抗生素研究所;华北制药厂抗生素研究所 菌种来源：从菌种保藏中心索取 保藏机构 国内： 1978年7月，中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM）在北京成立。 下设七个全国性菌种保藏管理中心 1. 普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC) 中科院微生物研究所：细菌、真菌 中科院武汉病毒研究所：病毒 保藏机构 2. 农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC) 中国农科院 3. 工业微生物菌种保藏管理中心(CICC) 轻工部食品发酵工业科学研究所 4. 医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC) 卫生部药品生物检定所：细菌 中国医学科学院皮肤病研究所：真菌 中国医学科学院病毒研究所：病毒 保藏机构 5. 抗生素菌种保藏管理中心(CACC) 国家医药总局四川抗生素研