《生物制药技术 叶丽老师》酶工程.pptVIP

三、酶传感器（enzyme sensor） 1、生物传感器的概念 对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。是由固定化的生物敏感材料作识别元件（包括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质）与适当的理化换能器及信号放大装置构成的分析工具或系统。 具有接受器与转换器的功能。 要求识别物质对被测物具有高度的敏感性和选择性 根据识别物质可分为：酶传感器、组织传感器、微生物传感器、免疫传感器 2、生物传感器的一般结构与工作原理 结构:有两个部分组成 生物分子识别元件（感受器）：酶、核酸、抗体、细胞等 信号转换器（换能器）：电化学电极、光学检测元件、热敏电阻、表面等离子共振器件等 酶传感器的工作原理: 待测物质经扩散作用进入生物传感器,通过分子识 别发生特异的生物化学反应,产生的生化信号经换 能器转换为可定量和可处理的电信号,进而可检测 出该物质的浓度. 根据反应产生的信号不同，可选择相应的换能器. 二、酶传感器的类型 酶电极（电位型、电流型） 热敏电阻酶传感器 离子敏场效应晶体管酶传感器 光纤酶传感器 ①葡萄糖电极与血糖测定仪 半透膜 酶胶层 感应电极 酶电极示意图 葡萄糖＋醌＋H2O 葡萄糖酸＋氢醌 葡萄糖氧化酶 氢醌 醌＋2H＋＋2e－ Pt 铂电极 ②脲电极 Urea + 2H2O 2NH4++2HCO3- 脲酶 产生的2NH4+为阳离子电极感应。 此外还有： 氨基酸电极 醇电极 尿酸电极 乳酸电极 青霉素电极 亚硝酸离子电极：菠菜亚硝酸还原酶产生NH3 思考题： 1、分离纯化酶的一般程序 2、酶分离纯化的注意要点 3、细胞破碎的方法，酶抽提的方法 4、透析、超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析、疏水层析、亲和层析的原理 5、固定化酶（细胞）的概念及优缺点 6、固定化酶的制备方法，及各种方法的特点和优缺点 7、生物传感器的概念、一般结构和基本工作原理 * 》10000r/min，》30000r/min超速 * 四、酶的纯度鉴定技术 原理 蛋白质-SDS复合物（1 g : 1.4 g） ，长椭圆棒形 掩盖了蛋白质原有电荷差别 迁移率是分子量的函数 分子筛效应 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS) 43 K 66.2 K 97.4 K 130 K 200 K M 1 2 3 4 5 6 M M：蛋白分子量标准 1：菌体破壁抽提液 2：硫酸铵沉淀 3：Q-sepharose层析洗脱液 4：phenyl-sepharose层析洗脱液 5：羟基磷灰石层析洗脱液 6：sepharyl S-300层析洗脱液 游离酶的缺点： 稳定性差、易失活。 不能重复使用，成本高。 不能与产物分离，酶反应后分离纯化困难。 酶的固定化技术通过各种方法（吸附、结合、包埋等）能够有效地对酶进行修饰，改善酶的化学稳定性，并可重复使用 第三节 酶与细胞的固定化 什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 一、固定化酶（细胞）的定义 固定化酶immobilized enzyme: 被局限于某一特定区域上的、并保留了它们的催化活力，可以反复、连续使用的酶 优点：可反复、连续使用，使用效率提高 酶的稳定性提高 产物溶液中无酶的残留 酶反应过程能够加以严格控制 较游离酶更适合于多酶反应 缺点：固定化过程中往往会引起酶的失活 固定化细胞：利用物理、化学等因素将细胞约束或限制在一定的空间界限内，但细胞仍能保留其催化活性，并具有能被反复或连续使用的活力 保留了胞内原有的多酶体系 保持了胞内酶系的原始状态，更稳定 无需进行酶的分离纯化 二、酶和细胞的固定化方法 酶和细胞的固定化方法 载体结合法 交联法