《生物制药技术 叶丽老师》第三节 发酵设备与消毒灭菌.pptVIP

2、有机氮源 来源：工业上常用的有机氮源都是一些廉价的原料，花生饼 粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、 蛋白胨、酵母粉等。 速效氮源**：以蛋白质降解产物形式存在的有机氮源可以直接被菌体吸收利用，这种氮源叫做速效氮源。如；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏。 迟效氮源**：氮以大分子蛋白质的形式存在，需降解成小分子肽和氨基酸后才能被利用，如豆 饼、葵花饼、花生饼等。 有机氮源成分复杂，除提供氮源外，有些有机氮源还提供大量的无机盐及生长因子。 例 玉米浆： ①可溶性蛋白、生长因子（生物素）、苯乙酸 ②较多的乳酸 ③硫、磷、微量元素等 氮源使用的一些相关问题 有机氮源和无机氮源应当混合使用 早期：容易利用易同化的氮源—无机氮源 中期：菌体的代谢酶系已形成、则利用蛋白质 有些产物会受氮源的诱导和阻遏 微量元素 为微生物细胞生长提供碳、氮源以外的多种重要元素 （包括大量元素和微量元素）的物质，多以无机盐的形式供给 无机盐生理功能 构成微生物细胞的组成成分; 调解微生物细胞的渗透压， pH值和氧化还原电位; 有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源 ; 构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂。 生长因子、前体和产物促进剂 1、生长因子 从广义上讲，凡是微生物生长不可缺少的微量有机物质如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。 有机氮源是这些生长因子的重要来源，多数有机氮源含有较多的B族维生素和微量元素及一些微生物生长不可缺少的生长因子 前体指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中合成到产物分子中去，产量有较大的提高。 2、前体 青霉素：分子量356 苯乙酸:分子量136 用法：前体使用时普遍采用流加的方法 前体一般都有毒性，浓度过大对菌体生长不利 苯乙酸，一般基础料中仅仅添加0.07% 前体相对价格较高，添加过多，容易引起挥发和氧化， 流加也有利于提高前体的转化率 3、产物促进剂 所谓产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。 促进剂提高产量的机制还不完全清楚，其原因是多方面的。 有些促进剂本身是酶的诱导物； 有些促进剂是表面活性剂，可改善细胞的透性，改善 细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产， 也有人认为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用； 有些促进剂的作用是沉淀或螯合有害的重金属离子。 水 对于发酵工厂来说，恒定的水源是至关重要的，因为在不同水源中存在的各种因素对微生物发酵代谢影响甚大。 水源质量的主要考虑参数包括pH值、溶解氧、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成和含量。 对于常规发酵，可靠、持久，能提供大量成分一致清洁的水。 水的功能 溶剂或运输介质的作用：营养物质和代谢产物都必须溶解在水里，才能被吸收或排出体（细胞）外。 参与细胞内一系列化学反应: 水的比热高：能有效的吸收代谢过程中放出的热量，有效控制细胞内温度的变化。 水能维持细胞的膨压（控制细胞形态）。 四个原则 （一）培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确） （二）营养物的浓度与比例应恰当（营养协调） （三）物理化学条件适宜（条件适宜） （四）根据培养目的选择原料及其来源（经济节约） 2、在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。*** ③ 当培养基成分确定后，剩下的问题就是各成分最适 的浓度，由于培养基成分很多，为减少实验次数常采 用一些合理的实验设计方法（正交实验等统计学方法）。 3、培养基设计的步骤 ① 根据前人的经验和培养基成分确定一些必须考虑 的问题，初步确定可能的培养基成分； ② 通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分； 摇瓶水平到反应器水平的优化配方 摇瓶、反应器培养基研究的两个层次 摇瓶——培养基设计的第一步 反应器—最终的优化的基础配方 例： 青霉素发酵 发酵摇瓶：玉米浆4%，乳糖10%，(NH4)SO4 0.8% 轻质碳酸钙1% 发酵罐:葡萄糖流加控制总量10-15%，玉米浆总量4-8% 补加硫酸、前体等 摇瓶发酵培养基和罐的基础培养差别很大 发酵培养基的设计和优化 摇瓶优化配方：菌种筛选，反应器研究的基础 发酵罐：反应器水平, 可以得出最 终优化的基 础配方 （1）实消：空罐消毒后注入培养基进行灭菌，一般采用