《生物制药技术 叶丽老师》抗体工程2015.pptVIP

免疫细胞因子 CH1 CH2 CH3 IL-2 scFv IL-2 免疫细胞因子(Immunocytokine) 将抗体片段与细胞因子融合，可将这些细胞因子靶向到肿瘤部位而发挥抗肿瘤作用，同时减少全身毒副作用，这类融合蛋白称为免疫细胞因子 目前与抗体融合的细胞因子有IL-2、IL-12、TNF及GM-CSF等 人白介素-2（rhIL-2） 肾细胞癌、 黑色素癌 副作用：全身性毛细血管渗漏综合征vascular leak syndrome (VLS) Tumor Necrosis Therapy-TNT TNT Ab targets necrotic regions of tumors composed of leaky dead cells 1. Viable area 2. Area of dying cells 3. Necrotic area 1 3 2 Fully Human TNT Interleukin 2 Fusion protein TNT IgG1/? McAb IL-2 Low immunogenecity Tumor targeted IL-2 immunotherapy Low IL-2 toxicity Enhanced antitumor efficacy Enhanced uptake of Chemotherapeutics 免疫桥连：抗体分子与另一特异性靶向分子融合，构建可以同时结合效应细胞和靶细胞的融合蛋白，从而达到免疫治疗的目的 将抗CD3的抗体与表皮生长因子(EGF)基因进行拼接形成融合蛋白，可将表达有CD3的T细胞与带有EGF受体的肿瘤细胞连接起来，介导T细胞杀伤效应 嵌合受体：是指将抗体的抗原识别部分与特定细胞膜表面蛋白分子融合，形成的融合蛋白表达于细胞表面，该融合蛋白既可利用抗体部分结合抗原，又可以通过膜蛋白部分传导信号至细胞内，引起细胞活化，产生特定的生物学效应； 如T细胞表面表达嵌合抗体(T-body)通过其表面的嵌合抗体与肿瘤细胞结合，从而激活T细胞杀伤肿瘤细胞或释放淋巴因子 （二）Fc抗体融合蛋白 利用Fc段所特有生物学功能与某些具有黏附或结合功能的蛋白融合，所获得的融合蛋白称为免疫黏附素（immunoadhesin） 增加融合蛋白在血液中的半衰期，使蛋白类药物长效化； 将Fc的生物学效应如ADCC、激活补体及调理作用等靶向到特定的目标； 用于融合蛋白的纯化和检测等 Etanercept，益赛普，是一种融合蛋白，一段是TNFα受体，一段是人IgG1的Fc端,治疗类风湿关节炎、强直性脊柱炎 五、纳米抗体 1993年在骆驼血中发现，天然缺失轻链和重链恒定区1(CH1)，只由一个重链可变区组成的单域抗体-VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)，由于其晶体结构呈椭圆形，直径2.5nm，长4nm，所以又称为纳米抗体（nanobody, Nb） 相对分子质量为15kDa，为普通抗体的十几分之一，这使它比普通的抗体分子更容易接近靶目标表面的裂缝或者被隐藏的抗原表位，所以它可以识别很多普通抗体所不能识别的抗原 纳米抗体结构简单、溶解性好、稳定性高且与抗原亲和力强，可以利用基因工程技术和抗体库技术对其进行改造，转变为多种形式、有特殊功能的分子用于疾病的诊断和治疗， 单价纳米抗体 多价和多特异性纳米抗体 “融合”纳米抗体 特点： 有完整功能的最小的抗原结合片段； 具有高度水溶性和构象稳定性； 能识别独特的抗原表位； 能有效地穿过血脑屏障 第四节 抗体库技术 抗体库技术（antibody library），是利用基因克隆技术克隆全套抗体可变区基因，然后重组到特定的表达载体，再转化宿主菌（细胞）以表达有功能的抗体分子片段，并通过亲和筛选获得特异性抗体可变区的技术。 利用抗体库技术筛选到的抗体基因用于构建和表达基因工程抗体 噬菌体抗体库技术 核糖体展示技术 一、噬菌体抗体库技术 噬菌体抗体库技术（phage display antibody library techniques）：是丝状噬菌体展示技术（phage display technology）与抗体组合文库技术（combinatorial immunoglobulin library technology）相结合而产生 该技术的出现开创了一条简便快捷的基因工程抗体生产路线，为人源抗体的制备提供了新途径，可视为抗体工程史的里程碑 （一）噬菌体抗体库技术的基本原理 以噬菌体为载体，将抗体基因与噬菌体编码外壳蛋白Ⅲ（cpⅢ）或Ⅷ（cpⅧ）的基因相连，在噬菌体表面以抗体-外壳蛋