DNA的复制 第二章 DNA的复制、损伤与修复.pptxVIP

第二章 DNA的复制、损伤与修复Central dogma of molecular biology 第一节DNA复制一、DNA复制的一般特征（一）DNA的半保留复制DNA在复制时，以亲代DNA的每一条链作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一条亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 “Heavy” DNA“Hybrid” DNA“Hybrid” DNA+“light” DNA1958年M. Meselson和F. Stahl用同位素示踪法实验证明DNA以半保留方式进行复制。（二）复制的一般特性复制起始点：DNA的复制时特定的起始区域。富含A-T包括起始蛋白结合位点和双链易解开的位点不同生物的起始位点的组成和数目差异较大原核生物通常只有一个复制原点真核生物有多个复制原点复制子：基因组能独立进行复制的单位叫复制子（replicon），一个复制子只含一个复制起点。在细菌、质粒、病毒和线粒体DNA中只含有一个复制起点，一个DNA分子就是一个复制子；真核生物DNA中有多个复制起点，同时进行复制，两个复制起点之间的DNA片段为一个复制子。Multiple eukaryotic replicons复制子复制叉复制叉：DNA分子复制时复制起点两条链解开成单链，两条单链分别作为模板，各自合成互补链，这种Y型的结构称为复制叉。复制方向和速度：复制方向：少数单向复制（一个复制叉），多数双向复制（两个复制叉）, 等速或不等速复制。大多数原核和真核DNA 都是从固定起始点开始，双向等速复制。也有一些特殊复制方向：单向等速复制，如质粒DNA ColE1。滚环复制：双向不等速：枯草杆菌复制叉移动不对称，一个走1/5，另一个复制叉走4/5。线粒体DNA也是不对称，一条链复制67%，另一条才开始复制。复制终点：环状DNA：存在复制重点序列，依靠蛋白因子识别简单的碰撞终止线性DNA：一些病毒，如腺病毒等，利用末端蛋白结合提供-OH进行复制真核细胞有端粒结构（三）DNA复制的酶学1、解离双链的酶和蛋白 DNA接链酶：利用ATP水解能量解开DNA双链中碱基配对的氢键，有方向性单链结合蛋白拓扑异构酶I、IIDNA拓扑异构酶：天然DNA的负超螺旋虽然有利于DNA的解旋，但随着复制的进行，复制叉前方亲代DNA中仍积累巨大的张力（正超螺旋），因此复制中需要DNA旋转酶去除解旋酶的解链产生的扭曲张力。需要ATP的过程。拓扑异构酶Ⅱ：能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子，中和正超螺旋。同复制有关。拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。细胞内DNA的正确缠结状态取决于拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的平衡。2、复制过程中的酶 引物酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶以dNTP为底物需要Mg2+激活聚合时必须有模板链和3’-OH末端存在DNA聚合酶不能使两个dNTP聚合，而只能使一个dNTP加在引物或前一段多聚核苷酸的3’-OH端，释放出PPi，PPi可继续分解提供能量。链的延伸都方向为5→3原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌）Properties of the DNA Polymerases of E. coliPropertyPol IPol IIPol III (core)*Mass (kD?), 27.5(ε), 8.6(θ)Molecules/cell40040YesYesYesExonuclease 3′?5′YesYesYesExonuclease 5′?3′YesNoNoProperties of the DNA Polymerases of E. coliPropertyPol IPol IIPol III (core)*Mass (kD?), 27.5(ε), 8.6(θ)Molecules/cell40040Polymerization 5′3′YesYesYesExonuclease 3′?5′YesYesYesExonuclease 5′?3′YesNoNo参与损伤修复，与低分子量DNA延长相关在DNA复制时切除RNA引物并填补其留下的空隙以及对DNA损伤的修复DNA 复制的主要聚合酶，还具有3’-5’外切酶的校对功能，提高DNA复制的保真性聚合酶Ⅰ为单一肽链的大分子蛋白质,可被特异的蛋白酶水解为两个片段其中的大片段称为Klenow fragment，具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶的活性小片段具有5’→3’外切酶活性。 聚合酶Ⅱ不参与DNA的复制，在DNA的损伤修复过程中起作用。聚合酶 Ⅲ的