高效液相色谱法课件1章节.pptVIP

三、溶剂的选择性与分类 根据溶剂的性质和图22-12溶剂选择性分类，各选择性组大致包括如下一些溶剂。Ⅰ组：脂肪醚（纯质子接受体）；Ⅱ组：脂肪醇（质子接受-给予体）；Ⅲ组：吡啶衍生物、四氢呋喃（质子接受体，易极化）；Ⅳ组：乙二醇、乙酸、甲酰胺；Ⅴ组：二氯甲烷、二氯乙烷（大偶极矩）；Ⅵ组：脂肪酮、酯、二氧六环；Ⅶ组：芳烃、芳醚、硝基甲烷；Ⅷ组：氟代醇、氯仿、水（质了给予体）。各种同系物属同一个选择性组。 三、溶剂的选择性与分类 从图22-12可以看到，Ⅰ、Ⅴ、Ⅷ三组溶剂距离最远。由一组溶剂变换到另一组溶剂，将发生最大的选择性变化，如正相色谱由三氯甲烷（Ⅷ）变为乙醚（Ⅰ）的情况。 同一组溶剂在分离中具有相似的选择性，不同组别的溶剂，其选择性差别较大。采用不同组别的溶剂，可显著改变溶剂的选择性。 四、不同色谱模式选用的流动相 (一)吸附色谱用流动相 对于常用硅胶作吸附剂的液固吸附色谱中，改变溶剂即可得到适宜的k。以硅胶为吸附剂时一些溶剂的ε0参见表22-5。如果选用初始溶剂太强，使样品组分的k值过小，则可由表中选值ε0较小的溶剂来代替；反之，若样品组分k值太大，则选ε0较大的溶剂。 通常吸附色谱使用二元混合溶剂作流动相，可使溶剂强度随其组成连续改变，可以获得最佳的分离选择性。若混合溶剂中强极性溶剂的含量占绝对优势或含量很低，其分离因子α呈现最大值。使用混合溶剂的另一个优点是可使流动相保持低的粘度，并可保持高的柱效。 四、不同色谱模式选用的流动相 (一)吸附色谱用流动相 吸附色谱中，样品的α值的改变可在等溶剂强度（ε0不变）下，用不同性质的溶剂替换强溶剂来试验，找到最适宜的流动相。选择不同溶剂时，除考虑ε0值外，还应考虑试样分子与溶剂分子间的氢健作用等因素。因吸附色谱分离机制和薄层色谱相同，可以薄层色谱作先导试验来确定液固色谱的最优分离条件。 四、不同色谱模式选用的流动相 (二)分配色谱用流动相 1．正相分配色谱 正相色谱的固定相是极性的，故增加溶剂的，可增加洗脱能力，使组分k值下降。选择合适值的溶剂，使样品k值在1～10范围内，通常在饱和烷烃，流动相主体为己烷、庚烷，可加入20%的极性改性剂。如正己烷中加入极性溶剂，调节极性溶剂的比例使能达到理想的k值。若分离的选择性不好，则改用其他组别的溶剂类改善选择性。若二元溶剂不行，还可考虑使用三元或四元溶剂体系。 四、不同色谱模式选用的流动相 (二)分配色谱用流动相 2、反相分配色谱 反相色谱固定相是非极性的，所以溶剂的极性增加，洗脱能力增加，样品的k值增加。使用的流动相相似于液固色谱法中使用非极性吸附剂时应用的流动相。此时流动相的主体为水，加入10%的改性剂，如二甲基亚砜、乙二醇、乙腈、甲醇、对二氧六环、乙醇、四氢呋喃、异丙醇等。 四、不同色谱模式选用的流动相 (二)分配色谱用流动相 2、反相分配色谱 溶质在混合溶剂流动相中的容量因子k会随改性剂的加入而减小，表明混合溶剂的洗脱强度增强。一般以水和甲醇或乙腈组成二元溶剂，已能够满足多数分离要求。有时也可加入适当的酸或碱来控制流动相的pH值，以防止出现不对称色谱峰。反相色谱常采用梯度洗脱，使每个组分都在适宜条件下获得分离。 四、不同色谱模式选用的流动相 (三)离子交换色谱 离子交换色谱流动相常用含盐的水溶液（缓冲溶液），有时加入适量的有机溶剂如甲醇、乙腈等，以增加某些组分的溶解度。溶剂强度和选择性与盐的类型、浓度、pH值以及加入的有机溶剂的种类和浓度有关。 四、不同色谱模式选用的流动相 (四)尺寸排阻色谱 排阻色谱和其他方法不同之处是，不用采取改变流动相组成的方法来控制分离度。故选择流动相仅需考虑能很好溶解样品，粘度要低，要与柱填料匹配。为减少样品和填料表面之间的相互作用（除了排阻色谱保留作用之外），如填料吸附作用和离子交换作用等，可采用控制流动相pH值和离子强度来解决。 第七节 HPLC分析条件的选择 一、分离条件的选择 （一）分离方法的选择 HPLC可供选择的固定相及流动相选择都有自身的特点和应用范围，选择分离类型应根据分离分析的目的、试样的性质和量的多少、现有设备条件等来确定最合适分离条件。对于不同的样品分离方式的选择可参见下图。 第七节 HPLC分析条件的选择 一、分离条件的选择 （二）梯度洗脱 根据分离度的要求，在色谱分离过程中样品组分的k值范围应控制在1～10之间。如果样品组分较少、性质差别不大，一般采用等度洗脱（isocratic elution）（溶剂组成与配比在一分析周期内保持恒定）可以使所有组分的k值都处于这个范围内。但是对于组分数目较多、性质相差较大的复杂混合物，采用等度洗脱时，所选择的溶剂强度对于一些组分不是太强就是太弱，其结果是弱保留组分很快流出，色谱峰