《机能实验学精品教学》肠缺血再灌注损伤.pptxVIP

肠缺血再灌注损伤 基础医学院 医学基础实验教学中心 一、实验目的 （一）掌握缺血再灌注损伤的概念； （二）学会建立肠缺血再灌注损伤的实验动物模型； （三）观察小肠缺血再灌注损伤时家兔的血流动力学改变及血清MDA含量的测定方法； （四）熟悉肠缺血再灌注的致伤机制和防治原则。 二、理论基础 （一）缺血再灌注损伤的定义 指组织缺血一段时间，当血流重新恢复后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重，器官功能进一步恶化的综合征。 二、理论基础 （二）缺血再灌注损伤的机制 肠缺血后，小肠粘膜损伤，内皮细胞坏死，中性粒细胞浸润，产生大量黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）及自由基等。 氧自由基生成增加 钙超载 炎性反应综合症 1、多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜 2、蛋白质和DNA分子结构的变化 1、线粒体功能障碍------ATP消耗，产生；2、钙依赖性的降解酶的激活------细胞结构破坏，死亡； 3、促进活性氧的生成------XO增多，花生四烯酸代谢增强。 1、机械的阻塞作用------内皮细胞坏死，产生大量炎性介质； 2、白细胞对组织的损伤作用------活性氧，水解酶。 氧自由基生成增加 1、多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜 2、蛋白质和DNA分子结构的变化 钙超载 氧自由基生成增加 1、多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜 2、蛋白质和DNA分子结构的变化 钙超载 氧自由基生成增加 1、多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜 2、蛋白质和DNA分子结构的变化 炎性反应综合症 钙超载 氧自由基生成增加 1、多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜 2、蛋白质和DNA分子结构的变化 炎性反应综合症 钙超载 氧自由基生成增加 1、多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜； 2、蛋白质和DNA分子结构的变化。 二、理论基础 （三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。 三、实验技术路线 （一）实验动物 家兔 （二）观察指标 1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量 丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD） MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。 SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。 MDA水平升高，SOD活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚至细胞死亡。 三、实验技术路线 （三）实验步骤 1、家兔捉拿、称重、麻醉、固定 2、颈动脉插管——动脉血压标记 3、辨认、分离肠系膜上动脉 三、实验技术路线-实验步骤 1、假手术组 1、3、5、7、9 2、阳性对照组 2、4、6、8、10 3、治疗组 ①硝苯地平组 11、13、15、17、19 ②氢化可的松组 12、14、16、18、20 肠休克模型制备及其干预 实验分组 取样要求 1、检测实验前观察指标 2、夹闭肠系膜上动脉 假手术组仅分离，不夹闭（假手术） 缺血至第30min时开始治疗 ①假手术组: 生理盐水3ml/kg ②阳性对照组：生理盐水3ml/kg ③硝苯地平组：尼莫地平1mg/kg ④氢化可地松组：15mg/kg 再灌注至第30min时 放血处死动物 夹闭前 测量动脉血压、脉压、心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、心率 夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、心率 动脉取血1.5ml 三、实验技术路线 附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液　　甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式： ③ 计算： （测定管吸光度－测定空白管吸光度）/（标准管吸光度－标准空白管吸光度）×10nM/ml=测定样品中丙二醛含量nM/ml。 ④ 参考值： 人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070 标准管ml 标准空白管ml 测定管ml 测定空白管ml 标准品 0.1 测试样品 0.1 0.1 甲醇 0.1 甲液 4.1 4.1 4.1 乙液 4.1 旋涡混匀器混匀，置沸水浴40分钟，4000转/1分钟、离心10分钟，吸取上