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第十一章 紫外-可见分光光度法; 　■分光光度法的特点： 灵敏度高------10-7 g·L-1 ~10 -10 g·L-1(微量或痕量分析） 相对误差小------2%~5% 应用广泛-----医药、卫生、环保、化工等领域。;第一节 吸收光谱的产生;（二）粒子性;1、电磁波谱（electromagnetic spectrum) 以波长大小顺序排列的电磁波谱图。;波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500mm 1cm 1m 光谱 ?射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无线电波 方法 光谱法 分光光度法 光谱法 核磁共振 ;;物质的颜色与光的关系;（三）分子能级;2、分子能级跃迁;3、能级跃迁、△E与λ关系;能 量 E; 将某物质（或其溶液），用不同波长的单色光作入射光，测定这一溶液吸光度A。每种波长的单色光都有其相对应的吸光度。然后以A为纵坐标，波长?为横坐标作图，所得曲线即为该物质（或其溶液）的吸收光谱 。;2、吸收光谱的意义;三、紫外光谱（Ultraviolet spectra)的产生;弱吸收，含杂原子的不饱和基团。例：C=O、 C=N;各类跃迁能量顺序;3、发色团和助色团;C、红移（red shift): 由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基）或采用不同溶剂后，吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）;很强 强;思考题;第二节 物质的吸光定量关系; 溶液对光的吸收除与溶液本性有关外，还与入射光波长、溶液浓度、液层厚度及温度等因素有关。; 1、 Lambert定律（ 1760年） 当入射光波长、溶剂和吸光物质种类、浓度和溶液的温度都一定时，该溶液的吸光度只与液层厚度成正比，关系式： A = k1L 。 k1为与被测物性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度和温度有关的常数;;3、吸光系数(absorptivity);4、吸光度的加和性(共存物不改变本身的吸光系数）;例2：用纯品氯霉素（M为323.15)配制100mL含有2.00mg的溶液，以1cm厚的吸收池在278nm处测得透光率为24.3%，求ε和 。;三、吸光度的测量;四、偏离比尔定律的主要因素;（一）光学因素 ;;讨论： 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 ;2．杂散光的影响： 杂散光：指从单色器分出的光不在入射光谱带宽??范围内，与所选波长相距较远 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值;（二）化学因素;光源系统;;混合光;平面光栅的分光作用;D、检测器 （ detector);;;;;二、分光光度计类型;（二）单光束分光度计;;（三）双光束分光光度计;1;2;2;第四节 药物定性与定量方法;;三、定量方法;例：精密称取VB12样品25.00mg，用水稀释配成100mL；精密吸取10mL再稀释配成100mL，取此溶液置于1cm吸收池于361nm处测得吸光度为0.507，已知百分吸光系数为207，求VB12百分含量。;解法二;2、标准曲线法 取对照品配成一系列已知浓度的标准溶液，在选定波长处（常是λmax ）同条件下测吸光度绘制A-C曲线，再根据被测物的吸光度从标准线上求出其浓度的方法。（仪器要求低，简单易行，适用大批量样品定量分析）; ;例 精密量取VB12注射液2.5mL，加水稀成10mL。另精密称取VB12对照品25mg加水稀成1000mL。分别置于1cm吸收池中在361nm处分别测得吸光度为0.508和0.518，求注射液的浓度及标示量的百分含量。;;本章作业