第十三章_液相色谱法.pptVIP

第13章 液相色谱法;第一节 概述;第一节 概 述;;1941 Martin和Synge提出液-液色谱理论，1944年出现纸层析、薄层色谱。 1952 James和Martin发展了气相色谱理论，出现气相层析GC。 1967 Kirkland等研制高效液相色谱法，相继出现亲和层析、凝胶层析等。 80年代出现超临界流体色谱法（SFC）及毛细管电泳法（CE）。 目前正朝色谱-光谱（质谱）联用向多维色谱和智能色谱方向发展，将是分析化学最活跃、最广泛的分离分析技术。;色谱法是一种分离技术 固定相（stationary phase） 分离过程中固定不动一相 流动相(mobile phase) 携带试样混合物流过此固定相的流体(气体或液体)另一相（如石油醚）（洗脱液、展开剂） 实质：分离（试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。）;（四）色谱法的特点;流动相 的物态 ;二、色谱法的分类;二、色谱法的分类;二、色谱法的分类;二、色谱法的分类; 色谱过程是组分的分子在流动相和固定相间多次“分配”的过程。 当流动相中携带的混合物流经固定相（Al2O3）时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相(石油醚：乙醚=1:4)的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。;色谱分离过程实验;（二）色谱术语;2、保留时间（retention time, ) 试样中被分析组分从进样后开始洗脱到流出液中出现最大浓度点所经过的时间。;4、分配系数 ;5、分配系数K与保留时间关系 K越小，在柱中移动速度越快， tR越小，即将先流出色谱柱；反之，K越大， tR越大，后流出色谱柱。 各组分的K值相差越大，各被分离组分越容易分离。;第二节 柱色谱法-LSC;基本原理：利用固定相的固体吸附剂表面对不同组分吸附力的大小及洗脱液对它的溶解作用（解吸作用）的差异进行分离。 特点：适合分离不同种类的化合物(醇类和芳香烃）。 （一） 吸附作用与吸附平衡 1、吸附作用：多孔性的固体吸附剂，因表面存在许多吸附中心而具有吸附作用。如硅胶的吸附中心为硅醇基。 2、吸附平衡：样品中的溶质分子与流动相分子竞争性占据吸附表面中心的过程。平衡时：;（二） 吸附剂及其选择(固定相);活性：I-V 五级，通常采用II、III级。当自由水含量17%，吸附能力极弱。;(2)氧化铝：吸附能力高于硅胶，有酸性pH=5-4 、中性pH=7.5和碱性pH=9-10三种。以中性应用最多。 碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物碱以及其它碱性化合物的分离。 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、醌以及酯类化合物的分离。 酸性氧化铝：适用于有机酸类的分离。 氧化铝的活性：I-V 五级， I 级的吸附作用太强， V 级的吸附作用太弱。所以一般常采用 II ， III 级。;（3）聚酰胺;（4）活性炭： 非极性吸附剂，有较强吸附能力，水中强。 适用范围：水溶性物质 洗脱能力：水中最弱，有机剂较强 （5）大孔吸附树脂： 不含交换基团，有大孔网状结构。它是吸附与筛选原理相结合的分离材料。吸附性由范氏力和H键产生，筛选性由多孔网状决定。 适用范围：水溶性化合物的分离纯化。如苷类化合物。;（三）流动相的选择;2、吸附剂活性与被分离组分极性关系;流动相选择规律;（四）操作方法;二、 液-液分配柱色谱-LLC;3、分配过程： 各组分在两相间不断进行溶解、萃取、再溶解、再萃取（连续萃取），进行多次分配。分配系数小的组分在流动相中分配的数量多，移动快；分配系数大的组分在固定相分配数量多，移动慢。故可彼此分离。;（二）载体;（三）流动相与固定相; 与吸附色谱的不同点 （1）装柱与吸附柱色谱不同：须先将固定液与载体混合。 （2）洗脱剂须用固定液饱和：洗脱时洗脱剂会溶解固定液;三、离子交换柱色谱法;类型：离子交换树脂分为阳离子和阴离子交换树脂。 流动相：水、酸、碱溶液。;阳离子交换树脂;（四）操作步骤 1、树脂预处理 用酸、碱除杂质，方法：阳离子交换树脂用HCl浸泡,转为H型，阴离子交换树脂用NaOH浸泡，转OH型。 2、装柱 3、交换与洗脱 4、再生;四、凝胶柱色谱法;凝胶柱色谱分离原理图;3、应用：凝胶色谱目前已广泛应用在天然药物化学、生物化学的物质分离中。生物大分子物