生物工程综合实验1.pptVIP

生物工程综合实验（二）结果汇报 汇报人：（实验第3小组） 蒋秀云、蒋阳辉、黄体欢 2011年11月8日 固态发酵实验——米曲霉的培养及蛋白酶的活性分析 固态培养基配方： 培养基设计方案的目的： 采用单一因素法，在其他条件一定的情况下，考察研究培养基的含水量对酶活力的影响。 实验数据记录 实验结果 由上表数据进行处理后得到以下结果： 1、成曲霉水分含量: 配方一：39.23%; 配方二：61.53%; 配方三：72.80% 2、成曲蛋白酶活力： 配方一：1079.91U/g；配方二：11731.14U/g； 配方三：6968.53U/g 时间对米曲霉产酶的影响 米曲霉中性蛋白酶的分离纯化研究 双水相萃取分离实验方案设计： 母液：PEG1000 60% (m/m) ； 柠檬酸钠 30% (m/m) 实验数据记录 粗酶液：蛋白浓度 0.675 mg/mL（稀释倍数 12 ）； 空白OD595nm ： 0.569 0.543 ； 酶液OD595nm： 0.991 0.995 中性蛋白酶活力： 48.55 U/mL （稀释倍数 10）； 空白OD275nm： 0.697 0.691 ； 酶液OD275nm： 1.188 1.171 双水相体系1：PEG1000 24%，柠檬酸钠12%（总质量20g） 上 相：体积V t 13 mL； 蛋白浓度0.0414mg/mL（稀释倍数 4 ）； 空白OD595nm： 0.817 0.822 酶液OD595nm： 0.940 0.921 中性蛋白酶活力 2.56 U/mL（稀释倍数 2 ）； 空白OD275nm：0.604 0.605 ； 酶液OD275nm： 0.720 0.745 下 相：体积Vb 4.8 mL 双水相体系2：PEG1000 24%，柠檬酸钠15%（总质量20g） 上 相：体积V t 10.5 mL； 蛋白浓度 0.0583 mg/mL（稀释倍数 4 ）； 空白OD595nm： 0.811 0.813 ；酶液OD595nm： 0.954 0.952 中性蛋白酶活力 2.09 U/mL（稀释倍数 2 ）； 空白OD275nm： 0.627 0.625 ； 酶液OD275nm： 0.738 0.723 下 相：体积Vb 7 mL 双水相体系3：PEG1000 24%，柠檬酸钠18%（总质量20g） 上 相：体积V t 9.5 mL； 蛋白浓度 0.0969 mg/mL（稀释倍数 4 ）； 空白OD595nm： 0.810 0.813 ； 酶液OD595nm： 1.023 1.019 中性蛋白酶活力 3.73 U/mL（稀释倍数 2 ）； 空白OD275nm： 0.607 0.603 ； 酶液OD275nm： 0.784 0.799 下 相：体积Vb 8 mL 双水相体系分离米曲霉中性蛋白酶结果 二、相比对酶分配的影响 结果分析和讨论 分析：经小组讨论产生上述原因，首先相比较低，从而导致对酶的分离和纯化的效果不很理想。而产生相比低的原因是因为PEG1000和柠檬酸钠的分配比例不是很合适，柠檬酸钠的梯度取得的过大，没能够找到最好的分配比，还有可能PEG在体系中质量分数不是很大等。其次也有可能是加入酶的质量浓度不够大。 总结：主要原因是相比较低而导致对酶的纯化倍数影响较大。 * * * * 培养基组成 编号 23 2 8 配方三 （含水量70%） 10 2 8 配方二 （含水量50%） 4.3 2 8 配方一 （含水量30%） 水（ml） 豆粕粉（g） 麸皮（g） 2 1 2 1 86 30.4890 31.2170 30.2170 0.748 0.735 0.469 0.469 培养基3稀释的粗酶液（10倍） 85 31.8835 32.4989 31.4988 1.018 1.052 0.491 0.491 培养基2稀释的粗酶液（12