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鸡胚繁殖病毒技术 2012年10月 许多病毒尤其是禽源病毒都能在鸡胚中生长繁殖，利用鸡胚可以进行病毒的分离、鉴定、抗原制备和疫苗生产。除了鸡胚外，鹅胚和鸭胚也可以用于某些病毒的增殖。 一、鸡胚的选择 1、冻干苗应选择受精率比较高的（90%以上）SPF种鸡蛋，鸡蛋必须新鲜、洁净。原因是SPF种鸡蛋不携带致病微生物，生产出来的疫苗更安全。SPF种鸡蛋没有干扰病毒增殖的母源抗体，与普通种蛋相比能明显提高病毒含量。 2、灭活苗可以选择受精率比较高的（90%以上）普通低免疫蛋，好处就是成本比较低。 二、鸡胚的孵化 1、消毒 新入孵的种蛋都要进行表面消毒，一般采用消毒液浸泡或福尔马林熏蒸。 0.1%～0.2%的新洁尔灭溶液浸泡。 福尔马林熏蒸：种蛋放入孵化器后，孵化器温度达到37℃，相对湿度达到90%，每立方米用13ml甲醛和6.5g高锰酸钾，放入烧杯中混合，迅速放入孵化器中关闭箱门，20分钟后打开箱门，通风排除甲醛蒸汽，继续孵化。 2、孵化 种蛋的孵化一般温度设定为38℃，相对湿度设定为65%，每天翻蛋1～4次。 孵化过程中要求有专人管理，记录种蛋的入孵时间、数量、出蛋时间、数量，还要每4小时记录孵化器内的温度、湿度等参数，如果遇到故障应马上报告以便及时进行维修，避免造成损失。 三、鸡胚接种 鸡胚接种前要先进行检蛋，选择发育良好、血线清晰的鸡胚。发育不良或没有发育（没有受精）的、变黑的、死亡的鸡胚应弃去不用。 1、接种方法： 根据不同的病毒（或其他微生物）选择不同的接种方法。包括尿囊腔接种、绒毛尿囊膜接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、静脉接种、脑内接种等。 其中最常用的方法是尿囊腔接种，方法是取9～10日龄鸡胚，画出气室范围，离气室边缘0.3～0.5mm无大血管处做一个记号，作为接种孔的位置。先用5%的碘酊消毒，15分钟后用75%的酒精脱碘，然后用消毒的锥子在记号处打一个小孔，用1ml注射器的针头刺入0.5～1cm，注入种毒，用白蜡封口。接种后继续孵化，一般温度设定为37℃左右，相对湿度设定为70%～90%，继续孵化2～7天，不必翻蛋。 四、接种后鸡胚的检验 接种后24小时照蛋，挑出死亡的鸡胚弃去不用。 以后每4～6小时照蛋一次，随时取出死亡的鸡胚，放入2℃～8℃冷库中冷胚。 五、收获病毒液 1、 消毒： 把冷却好的鸡胚放入无菌室内，先用5%的碘酊在鸡蛋的气室处涂抹消毒，15分钟后用75%的酒精脱碘。 2、收获：根据不同的病毒收获不同的成分，最常用的是鸡胚尿囊液。用大镊子剪去气室部分的蛋壳，注意蛋壳的碎屑不要掉到里面，用灭菌的医用眼科镊子斜插入绒毛尿囊膜内，压向胚胎一侧，用玻璃吸管把尿囊液吸入无菌的500ml瓶中，尽量把胚液吸净。 3、编号：把收获的病毒液每瓶贴上标签，注明名称、批号、编号、生产日期等信息，避免混淆。 六、病毒液的检验 1、无菌检验： 收获的病毒液如果用于冻干苗的生产要逐瓶进行无菌检验。 检验方法：先准备好检验培养基每套2支酪胨琼脂和2支硫乙醇酸盐，将培养基与收获的病毒液对应编号，每瓶病毒液用灭菌的注射器抽取2ml左右，每支加入0.5ml左右，盖好塞后分别放入37℃和25℃培养箱中培养，5天后观察结果，固体培养基斜面上有菌生长、液体培养基变浑浊的判为污染，应弃去不用。 2、病毒含量测定： 可以根据情况多瓶混合后进行检验，根据不同的病毒采用不同的方法测定病毒含量，为配苗提供依据。 3、其他检验： 支原体检验、外源病毒检验、安全检验等，一般半成品不做，只检验成品。 七、病毒液的保存 经过检验的病毒液应马上加入抗生素，防止细菌污染，塞上胶塞，放-15℃冷库保存，保存期限视不同病毒而定，一般不应超过6个月。 * *