2005年版《中国药典》研讨.ppt

江苏省苏州药品检验所 2005年版《中国药典》研讨 江苏省苏州药品检验所 顾炳仁 讨 论 内 容 热原检查法 异常毒性检查法 过敏反应检查法 抗生素微生物检定法 细菌内毒素检查法 一、热原检查法 试验前的准备 在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～25℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，避免噪音干扰。家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直至试验完毕。 结果判断 在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数仅有1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下，均认为供试品的热原检查符合规定。 在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃，均认为供试品的热原检查不符合规定。 当家兔升温为负值时，均以0.℃计。 二、异常毒性检查法 无实质性修改内容 注意：环境条件 动物来源 该法有被减少的可能 三、过敏反应检查法 为新增方法 本法系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体内，间隔一定时间后静脉注射供试品进行攻击，观察动物出现过敏反应的情况，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应。 供实验用豚鼠应健康合格，体重250～350g，雌鼠应无孕。在实验前和实验过程中，均应按正常饲养条件饲养。做过本实验的豚鼠不得重复使用。 供试品溶液的配制 除另有规定外，均按各品种项下规定的浓度配制成供试品溶液。 检查法 除另有规定外，取上述豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供试品0.5ml，共3次，进行致敏。然后将其均分为2组，每组3只，分别在首次注射后第14日和第21日，由静脉注射供试品1ml 进行攻击。每日观察每只动物的行为和体征，首次致敏和攻击前测定和记录每只动物的体重。观察攻击后30分钟内，动物有无竖毛、呼吸困难、抽搐等过敏反应症状。 结果判定 静脉注射供试品后30分钟内，不得出现过敏反应。如有竖毛、喷嚏、干呕、连续咳嗽3声和呼吸困难等现象中的2种或2种以上，或出现抽搐、休克、死亡现象之一者，判供试品不符合规定。 四、抗生素微生物检定法 本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。 抗生素微生物检定法 包括两种方法，即管碟法和浊度法。 测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90％或高于估计效价的110％时，应调整其估计效价，重新试验。 除另有规定外，本法的可信限率不得大于5％。 第一法 管碟法 本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法 第二法 浊度法 本法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。 菌悬液制备 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液 取金黄色葡萄球菌〔CMCC（B） 26 003〕的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水或0. 9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。 。  大肠杆菌（Escherichia coli）悬液 取大肠杆菌〔CMCC（B） 44 103〕的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。 白色念珠菌（Candida albicans）悬液 取白色念珠菌[CMCC(F)98001]的改良马丁琼脂斜面的新鲜培养物，接种于10ml培养基IX中，置35～37℃培养8小时，再用培养基IX稀释至适宜浓度，备用 标准品溶液的制备 标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照各品种项下的规定进行稀释。 标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。 供试品溶液的制备 精密称（或量）取供试品适量，照各品种项下规定进行供试品溶液的配制。 含试验菌液体培养基的制备 临用前，取规定的试验菌悬液适量（35～37℃培养3～4小时后测定的吸收值在0.3～0.7之间，且剂距为2的相邻剂量间的吸光度差值不小于0.1），加入到各规定的液体培养基中，混合，使在试验条件下能得到满意的剂量－反应关系和适宜的测定浊