4.1 DNA的粗提取与鉴定—《K三关》2017-2018学年高二生物人教选修1.doc

专题4 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、提取DNA的方法 提取生物大分子的基本思路是选用一定的 方法分离性质不同的生物大分子。 1．DNA和蛋白质在不同浓度的 中溶解度不同，当该溶液浓度在 时，DNA的溶解度最低。 2．DNA 酒精溶液，利用这一原理可以将DNA与蛋白质进一步地分离。 3．蛋白酶能水解蛋白质，对DNA ；比较而言， 更耐受高温；洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响。 4．在 条件下，DNA遇 会被染成蓝色。 二、实验操作 1．实验材料：应选用DNA含量相对较高的生物组织。 2．破碎细胞：动物细胞如鸡血细胞。可往鸡血细胞液中加入一定量的 ，过滤后收集 即可；如果是植物材料，需要先用 溶解细胞膜，同时加入一定量的 ，进行充分地 ，过滤后收集滤液。 3．去除滤液中的杂质 方案一在滤液中加入 的NaCl溶液，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液物质的量浓度为 析出DNA，过滤除杂后，再用2 mol/L的NaCl溶液溶解 DNA。 方案二直接在滤液中加入 ，反应一段时间，分解其中的 。 方案三将滤液放在 的恒温水浴锅中保温一段时间。 三、DNA的析出与鉴定 1．DNA的析出：用与滤液体积相等的 的 溶液。 2．DNA的鉴定：用2 mol/L的NaC1溶液溶解DNA后，向其中加入4 mL的 试剂。将试管置于沸水中加热5分钟， 后，观察含有DNA的试管是否变 。 一、物理或化学 1．NaCl溶液 0.14 mo/L 2．不溶于 3．没有影响 DNA 细胞膜 4．沸水浴 二苯胺 二、2．蒸馏水 滤液 洗涤剂 食盐 搅拌和研磨 3．2 mol/L 0.14 mol/L 嫩肉粉 蛋白质 60~75 三、1．冷却 95%的酒精 2．二苯胺 冷却 蓝 一、DNA粗提取和鉴定的基本原理 1．DNA粗提取的主要原理：利用DNA与蛋白质等物质物理和化学性质的差异进行提取。各种方法依据原理如下： （1）在NaCl溶液中的溶解度 项目 溶解规律 物质的量浓度为2 mol·L-1 的NaCl溶液 物质的量浓度为0.14 mol·L-1的NaCl 溶液 DNA 溶解 析出 蛋白质 部分发生盐析沉淀 溶解 总结 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同。当NaCl溶液的物质的量浓度低于0.14 mol·L-1|时，DNA的溶解度随NaCl溶液物质的量浓度的增加而逐渐降低：NaC1溶液的物质的量浓度为0.14 mol·L-1时，DNA的溶解度最小；当NaC1溶液的物质的量浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大②选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的 （2）在酒精中的溶解情况 DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用该性质可将DNA和蛋白质进一步地分离。 （3）对酶、高温和洗涤剂的耐受性 项目 DNA 蛋白质 蛋白酶 没有影响 水解 高温 80 ℃以上会变性 60~80 ℃高温下变性 洗涤剂 没有影响 瓦解细胞膜 2．DNA鉴定的原理： DNA+二苯胺蓝色。 说明：二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。 1．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述，错误的是 A．DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的变化而变化 B．向鸡血细胞液中加入蒸馏水的目的是使其吸水胀破，释放出其中的DNA C．把DNA加入二苯胺溶液，在沸水浴中颜色不变，只有冷却后才能观察到蓝色 D．向滤液中加入冷却酒精的目的是除去DNA中的杂质，纯化DNA 【答案】C 【解析】DNA在0.14 mol/LNaCl溶液中的溶解度最低，高于或低于这个浓度，溶解度上升，A项正确；鸡血细胞液中加入蒸馏水的目的是使其吸水胀破，释放出其中的DNA，B项正确；在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，C项错误；DNA不溶于酒精，因此向滤液中加入冷却酒精的目的是除去DNA中的杂质，纯化DNA，D项正确。 二、实验设计 1．实验材料的选择及处理 （1）不选择