生物化学课件第01章2.pptVIP

(二)研究构象的方法 2 2．重氢交换法和旋光色散法：测定蛋白质分子中α-螺旋体的含量。 3．核磁共振光谱法：测定蛋白质分子中哪个氨基酸残基发生构象变化。 4．园二色法：测定α-螺旋和β-折叠片的含量。 （三）维持蛋白质的三维构象的作用力1 一个氢原子连接两个电负性强的原子（如氧、氮等）。其中一个为共价键，另一个即为氢键。在α-螺旋和β-折叠中占有极重要的地位，对蛋白质分子三维构象的维护也很重要。 正负带电基团之间的吸引力，如NH4+与COO-。静电引力较强，但对蛋白质分子三维构象的稳定贡献不是很大，有时也称为离子键或盐键。 （1） 氢 键 （2） 静 电 引 力 原子团相互接近时诱导产生的。它变化多样，对维持蛋白质活性中心的构象影响很大。 （三）维持蛋白质的三维构象的作用力2 （3）范德华力 （4）疏水相互作用： 非极性基团为了避开水相而群集在 一起的作用力。疏水作用是维持蛋白质 高级结构的重要因素。 两个硫原子之间形成的共价键。此键作用很强，可把不同肽链或同一条肽链的不同部分连在一起，对稳定蛋白质构象起重要作用。大多数蛋白质分子由于二硫键的断裂其生物学活性随即丧失。 维持蛋白质构象的化学键主要是次级键（氢键、离子键、疏水作用和范德华力）。这些次级键是非共价键。 肽键、二硫键、酯键等被称之为共价键 （三）维持蛋白质的三维构象的作用力3 （5）二硫键（二硫桥）： （二）蛋白质分子的二级结构1 蛋白质的二级结构是指蛋白质多肽链（一级结构）本身的折叠和盘绕的方式。 天然蛋白质一般均含有α-螺旋、 β-折叠和β-转角的结构。 类型： 定义 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋 最常见的二级结构形式。 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋特点1 ①每隔3.6个氨基酸残基，螺旋上升一圈。上升一圈相当于向上平移0.54nm，即每个氨基酸残基上升0.15nm，每个残基沿轴旋转1000。 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋特点2 ②氨基酸残基侧链伸向外侧，相邻螺圈之间形成链内氢键。 氢键是由每个氨基酸残基的N-H与前面隔三个氨基酸残基的C=0形成的。 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋特点3 ③一般为右手螺旋。 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋特点4 ④链中如有脯氨酸，则螺旋被中断，产生一个“结节”，这是因为脯氨酸的亚氨基上的氢参与肽键形成后没有多余的氢原子形成氢键，这样肽链拐弯不再形成α-螺旋。 脯氨酸 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋特点5 ⑤另外，甘氨酸由于没有侧链的约束，难以形成α-螺旋所需的二面角。 其次，如肽链中连续存在带相同电荷的氨基酸，由于同性电荷相斥也会影响α-螺旋不稳定。 甘氨酸 （二）蛋白质分子的二级结构2 二级结构的类型1 （1）?-螺旋 * * 第二节 蛋白质分子的结构 二、蛋白质一级结构的研究方法 一、蛋白质分子的一级结构 三、蛋白质的三维构象 一、蛋白质分子的一级结构1 ☆一级结构是氨基酸按一定的排列顺序构成的蛋白质肽链骨架。 一级结构(Primary structure)的含义 R1,R2,R3…代表了不同的侧链基团， 如羟基， 巯基，羧基， 氨基等他们对维持蛋白质的立体结构和行使蛋白质的功能起着重要的作用。 从结构上看， 肽链中的氨基酸不是完整的氨基酸分子， 因此 称为氨基酸残基。 一、蛋白质分子的一级结构2 一、蛋白质分子的一级结构3 胰牛胰岛素的一级结构1 一、蛋白质分子的一级结构3 我国1965年在世界上第一个用化学方法人工合成的蛋白质就是这种牛胰岛素。 胰牛胰岛素的一级结构2 二、一级结构的研究方法1 1.样品必需纯（97%以上）。 2.知道蛋白质的分子量。 多肽链的氨基酸顺序主要是根据英国F.Sanger实验室发展的方法进行测定。 测定蛋白质的一级结构的要求 二、一级结构的研究方法2 1 拆分多肽链（8M尿素，6M盐酸胍或高浓度的盐处理， 而后根据大小或电荷的不同进行分离） 2 断裂多肽链内的二硫键 3 氨基酸组成的分析 4 分析多肽链N末端残基 5 分析C末端残基 6 多肽断裂成肽段 7 测定各个多肽段的氨基酸顺序 8 确定肽段在多肽段中的次序 9 确定多肽链中二硫键的位置 下面是氨基酸测序中的几个重要方法 （二）蛋白质N-末端和C-末端测定1 N-末端残基的分析1 二硝基氟苯（DNFB）法（α-氨基反应） Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。 在酸性条件下水解，得到黄