仪器分析----第17章 高效液相色谱法.pptVIP

2 、液相色谱仪器（high performance liquid chromatograph） 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 液相色谱仪（5） 二、 HPLC仪器构成 (3) 梯度淋洗装置 (3) 分离系统 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～ 40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 1．使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有 一定的溶解度)。 2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱 柱的pH范围。 3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。 4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理。 5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱 子冲洗干净，并保存大乙腈中。 6．压力升高是需要更换预柱的信号。 (4) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器 b. 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器 d. 荧光检测器 e. 电导检测器 f. 质谱检测器 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机 化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm ×10mm，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较 c. 示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最 多的检测器； 可连续检测参比池和样品 池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）；灵敏 度低、对温度敏感、不能用于 梯度洗脱；偏转式、反射式和 干涉型三种。 示差折光检测器 d. 荧光检测器 荧光检测器是高压液相色谱仪常用的一种检测器。用紫外线照射色谱馏分，当试样组分具有荧光性能时，即可检出。其特点是选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，最低检出限可达10-12g/ml，适合于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析。也可用于检测不发荧光但经化学反应后可发荧光的物质。如在酚类分析中，多数酚类不发荧光，为此先经处理使其变为荧光物质，而后进行分析。 三、高效液相色谱的固定相和流动相 1、固定相 高效液相色谱固定相根据其承受压力来分，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体：二氧化硅为基质，可承受7.0×108～1.0×109Pa的高压，如果在二氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶：主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。 表面多孔型：基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。 全多孔型固定相：它由直径为10nm的硅胶微粒凝聚而成。也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔型固定相，这类固定相由于颗粒很细（5～10μm），孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙 腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 流动相选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化