呼吸系统疾病动物模型2（吉林大学）.pptVIP

82 [操作方法] 体重250g的SD或Wistar大鼠,性别不限。通过静脉缓慢注射油酸0.1ml/kg体重，注射油酸后不同时间处死动物,称体重,开胸，结扎气管后取出心肺，分离心脏,称肺重，测量肺系数。 二、油酸诱发家兔肺水肿模型 [操作方法] 体重2.5kg左右家兔。从兔耳缘静脉缓慢注射油酸0.08 ml/kg体重，注射油酸后不同时间处死动物，开胸取全肺，观察肺体积、肺表面色泽、气管内有无泡沫液体溢出，并称肺重，测量肺系数。 三、肾上腺素诱发大鼠肺水肿模型 [造模原理] 大剂量外源性肾上腺素进入机体后,一方面引起体血管与肺血管强烈收缩,导致肺动脉压上升,肺毛细血管内压力明显升高，水分进入肺间质，引起肺间质水肿进而累及肺泡上皮细胞，出现肺泡水肿。 另一方面肾上腺素直接作用于肺毛细血管内皮细胞，可以增强血小板和白细胞的聚集，释放氧自由基。另外，肾上腺素还可间接影响与通透性关系密切的缓激肽及组胺等，使血管内皮及肺泡上皮通透性增加。上述机制协同作用，形成致死性、蛋白漏出性肺水肿。 四、肾上腺素诱发家兔肺水肿模型 [操作方法] 家兔2.5~3kg。家兔耳缘静脉缓慢注射0.1%肾上腺素1.0ml/kg体重。 解剖可见肺脏明显肿大、膨隆、淤血、出血,切面有粉红色泡沫样液体溢出。肺湿重和肺系数可增至正常对照的2~3倍或以上。间质和肺泡内充满富含蛋白的水肿液,肺不张,萎陷,出血。 第九节 （√） 肺纤维化动物模型 肺纤维化（pulmonary fibrosis）是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局，是呼吸衰竭的主要病理基础，其病理改变过程是肺部炎症导致肺泡持续性损伤，经反复破坏、修复、重建，最后引起细胞外基质过度沉积。 [造模原理] 博莱霉素(bleomycin)致肺纤维化的机制迄今未明，可能与自由基损伤、免疫机制和胶原调节失调等有关,其中自由基损伤可能是主要机制,活性氧造成急性肺泡炎,进而发展为肺纤维化。 [实验动物] 体重200g左右的SD或Wistar大鼠。 [主要试剂] 博莱霉素, 用生理盐水配成4mg/ml溶液.立式照明灯或额戴式喉镜；斜端聚乙烯塑料管(作为气管插管用)。 [操作步骤] 1.乙醚麻醉后, 仰位以上门齿为悬挂点使大鼠斜挂在60°鼠台上, 颈前放置照明灯 2.垫小块纱布将鼠舌拉出, 用压舌板压住舌腹, 趁动物吸气瞬间迅速将平端聚乙烯塑料管(连1ml注射器,内盛博莱霉素NS溶液)通过声带开口插入气管4~5cm, 用棉絮试验导管是否进入气管,确定后缓慢注入博莱霉素溶液, 剂量为5mg/kg(0.25ml/只)。 4.注入药液后3、7、14和28d处死动物, 收集肺标本, 部分用于检测肺羟脯氨酸含量等, 部分用中性福尔马林固定, 常规石蜡切片, HE和结缔组织染色。 3.注入药物后将动物直立搓动旋转, 尽量使药液在肺内分布均匀。 [结果] 注入药液后3d和7d表现为肺明显急性炎症,肺间隔水肿,炎症细胞浸润,以嗜中性粒细胞和单核巨噬细胞为主, 伴有轻度出血。 14d肺脏系数(肺重/体重)增加,肺泡壁肺泡巨噬细胞、淋巴细胞等炎症细胞明显减少,成纤维细胞增多,肺泡隔明显增宽,有胶原沉积,呈斑片状纤维化改变。 28d时肺组织结构破坏, 肺泡腔明显缩小, 部分肺泡塌陷或消失, 肺间质出现大量胶原纤维和成纤维细胞, 形成弥漫性肺纤维化。 [模型评价] 1. 博莱霉素是多肽类抗肿瘤药物, 单次气管内注入可复制出与人类肺纤维化相似的动物模型, 具有操作简便、造模稳定的优点, 是目前最常用的肺纤维化动物模型。 2. 适当掌握麻醉深度, 气管插管操作应熟练, 否则可能造成咽喉、声带损伤。 3. 除前述的气管插管外, 也可在麻醉下, 切开颈前皮肤分离气管, 用4号针头在气管环状软骨之间刺入气管内注药, 这在小鼠较为常用. 也可采用经鼻吸入的方法. 4. 用博莱霉素也能在仓鼠、小鼠等动物诱发肺纤维化, 基本方法与大鼠模型相同. 小鼠博莱霉素的用量同大鼠, 但也可用2.5mg/kg体重. 5.也可用6~8周龄雄性ICR小鼠，经鼻滴入博莱霉素3 mg/kg体重，可制备与气管内直接给药同样的肺纤维化模型，给药2周时出现明显肺纤维化。此方法对动物损伤小，死亡率低。 [肺纤维化程度的半定量方法] 制备肺标本石蜡切片，HE和Masson三色染色,光学显微镜观察,进行半定量,分别判断肺泡炎和肺纤维化的程度。 1.肺泡炎程度 2.肺纤维化程度 第十节 肺结核病动物模型 目前，全球结核病(tu