实验二、细菌的生理学(09级）.pptVIP

张淑杰 zhangshujie2005@126.com 3725918 (办) 教学主楼544 实验二 细菌的生理学 (第三周) 实验内容 基础培养基的制备过程 细菌的接种技术和培养方法 (学生操作:平行划线练习) 细菌代谢产物的测定 (生化反应结果观察,记录结果) 细菌生长情况的观察 (示教平板:描述菌落特征) 目的要求 掌握基础培养基的概念、成份、制备过程、种类及用途。 掌握细菌的纯种分离培养技术和熟悉不同种类培养基接种法。 掌握细菌培养结果的观察与描述方法，了解常用细菌培养法。 掌握细菌常见的生化反应的原理、结果观察、判读及实际意义。 一、基础培养基的制备（示教） 1.培养基的概念： 培养基是用人工方法，将多种物质按照各类微生物生长繁殖所需要而配制的一种混合营养料。 2.培养基的制备过程 以牛肉膏汤培养基为例（液体） 成分： 牛肉膏3克 蛋白胨10克 氯化钠5克 蒸馏水1000毫升 ⑴肉汤培养基 取1000毫升肉浸液，加入10克蛋白胨和5克氯化钠 经上述步骤制成。 其营养价值较牛肉膏汤要高。 但因肉浸液制作烦琐，而牛肉膏汤培养基制作简单，故常用。 ⑵肉汤琼脂固体、半固体培养基 琼脂：属于凝固剂。其特点是当温度达到98℃以上可融化于水，45℃以下则凝固。 肉汤琼脂半固体培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入加入0.3～0.5％琼脂制成。 肉汤琼脂固体培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入2～3克的琼脂制成。 3.培养基的种类 按照培养基的物理性状可分为： 液体培养基 固体培养基 半固体培养基三类 按照培养基的组成成分分为: 天然、合成、半合成三类培养基 按照培养基的用途可分为五类： 基础培养基 增菌（营养）培养基 选择培养基 鉴别培养基 厌氧培养基 4.培养基的用途 用于疾病病原学的诊断和鉴定 研究细菌学的生理生化特性 用于菌种的保存 制备各种生物制剂产品 基因工程中的应用 二、细菌的分离培养技术 大多数细菌都可用人工的方法进行培养，以便进一步观察和研究各种生物学特性。根据研究的目的和细菌生长的需要，要采用不同的接种技术和培养方法。 接种技术一般分为分离培养法和纯种接种法 （一）分离培养法 细菌分离培养的目的是获得纯种（单个菌落）。 分离培养成纯种菌的方法有： 平板划线法（最为常用） 倾注平板法 动物接种分离法 1．平行划线法（操作）： 标记（菌名、姓名、班级、日期） 涂基线 划线（用腕力轻快的滑移，划线不能重叠） 划线完毕，将琼脂平板培养基盖上皿盖，将培养皿倒置放在孵育箱培养18-24小时观察结果。 平行划线法的示意图 2．分区划线法： 基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线前要烧灼接种环，以杀灭环上留剩的菌液。 本次试验要求同学首先掌握细菌分离培养的平行划线法。 分区划线法示意图? 三段分区法 四段分区法  五段分区法 分区划线培养结果 【实验结果观察记录】 细菌生长情况的观察 观察琼脂平板表面生长的各种菌落特征：注意其大小、形 状、表面、边缘、湿润度、透明度、色素等性状（血平板要注意溶血性能）。 2、菌落的三个类型： 光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S型 粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 粘液型菌落（Mucoid type Colony）：又称M型 （二）细菌纯种接种法 1.斜面培养基接种法 2.液体培养基接种法 3.半固体培养基穿刺接种法 斜面接种法 液体培养基接种法 半固体培养基种接法 （三）细菌的培养方法 一般培养法 二氧化碳培养法 厌氧培养法 三、细菌代谢产物的测定 ——— 常见的生化反应 细菌常见的生化反应 结果观察及记录 单糖发酵试验（葡、乳） IMViC试验 硫化氢产生试验 【材料】 1.菌种：大肠杆菌、乙型副伤寒杆菌和痢疾杆菌斜面培养物。 2.培养基：葡萄糖、乳糖半固体发酵管。 3.指示剂：溴甲酚紫[pH 5.2(黄色)-6.8(紫色)] 【方法】 半固体穿刺接种法 【结果观察】 仅产酸者用“+”表示 即产酸又产气用“⊕”表示 不分解者用“－”表示。 可观察细菌的动力 五种单糖管： 葡 乳 麦 甘 蔗 （二）IMViC试验 【材料】 菌种：大肠杆菌、产气杆菌的18～24小时斜面培养物