dcr3和egfr基因共沉默抑制对人结肠癌细胞株sw480体外生长影响的研究word格式论文.docxVIP

本课题为福建省教育厅科技项目课题编号：JA10146目录英文缩略词表………………………………………………………………………1 中文摘要……………………………………………………………………………2 英文摘要……………………………………………………………………………4 前言…………………………………………………………………………………6 论文正文材料与方法……………………………………………………………………7 结果……………………………………………………………………………21 讨论……………………………………………………………………………26 结论……………………………………………………………………………31 参考文献………………………………………………………………………32致谢…………………………………………………………………………………34 综述…………………………………………………………………………………35英文缩略词表ABRIVIATIONS英文缩写DcR3英文全文decoyreceptor3中文名称诱骗受体3TNFRtumornecrosisfactorreceptor肿瘤坏死因子受体EGFRsiRNA PTGSFasLRNAiepidermalgrowthfactorreceptor smallinterferingRNApost-transcriptional genesilencing FasligandRNAinterference表皮生长因子受体小干扰RNA 转录后基因沉默Fas配体RNA干扰dsRNAdoublestrandedRNA双链RNARSICFBSRNA-inducedsilencingcomplexFetalbovine serum基因沉默复合物胎牛血清BpDEPCbasepair(s)diethylpyrocarbonate碱基对焦炭酸二乙酯DMSO EBMinHdimethylsulfoxide ethidiumbromide minutehour二甲基亚砜溴化乙啶分钟小时DNAdeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸RNA FCMODribonucleic acid FlowCytometryopticaldensity核糖核酸流式细胞术光密度1DcR3 和EGFR基因共沉默抑制对人结肠癌细胞株SW480 体外生长影响的研究中文摘要福建医科大学附属第一医院胃肠外科研究生：林建安导师：叶建新研究背景和目的：DcR3诱骗受体3 (decoyreceptor3，DcR3)是PittiRM等在1998 年发现的一种新的肿瘤坏死因子受体（tumornecrosisfactorreceptor），TNFR超家族成员，并命名为DcR3诱骗受体3 (decoyreceptor3，DcR3。DcR3 缺乏跨膜序列，是一种分泌蛋白，具有调节细胞生长发育和分化以及抗凋亡的生物学特性，具有广阔应用前景[1]。表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR) 介导的信号转导与细胞的增殖、分化、生存、转移等的调节息息相关，是肿瘤治疗的重要靶点，其靶向药物西妥昔单抗已经应用于临床且取得良好的效果[2]。RNA干扰是一种基因表达抑制的方法，由序列特异性的双链RNA（小片断RNA 大约21-23bp 即siRNA）所诱导的基因沉默现象，具有高度特异性和高效持久性[3][4]。本实验根据DcR3、EGFR的cDNA序列构建分别针对DcR3和EGFR的siRNA，探讨通过siRNA共沉默DcR3和EGFR对SW480 细胞体外生长情况的影响的研究，并与沉默单个基因的作用效果进行比较。方法：本实验根据DcR3、EGFR的cDNA序列分别设计和合成3对针对DcR3 和EGFR的siRNA，分别通过脂质体将各个siRNA转染入SW480 细胞，通过实时定量Realtime-PCR检测各个siRNA对其靶基因mRNA下调作用，通过Western blot检测其靶基因蛋白的表达，分别筛选出针对DcR3和EGFR抑制效果最强的siRNA，以脂质体转染法将针对DcR3 和EGFR作用效果最强的siRNA单独或联合转染SW480细胞；通过MTT法检测转染后细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡状态，比较各处理组细胞的增殖活性和凋亡状态。结果：① realtime-PCR检测发现，3 对针对DcR3 的siRNA对SW480 细胞的靶基因的mRNA抑制效率为32%，42%，30%，3 对针对EGFR的siRNA对SW480 细胞的靶基因的mRNA抑制效率39%，63%，48%；通过westernblot检查证实，这些siRNA对SW480 细胞靶基因蛋白的表达抑制效果与realtime-PCR所