dc在高危角膜移植排斥反应中免疫调节机制的实验分析word格式论文.docxVIP

摘要目的：培养和诱导大鼠骨髓来源的树突状细胞（dendritic cell，DC），研究未成熟树突状细胞（immaturedendriticcell，imDC）对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用，探讨imDC 诱导免疫耐受的机制。方法：联合应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）和白细胞介素（Interleukin，IL）-4培养、诱导、扩增大量的imDC，肿瘤坏死因子-α（tumornecrosis factor，TNF-α）诱导其成为成熟树突状细胞（mature dendritic cell，mDC），结合形态学、细胞表面标志加以鉴定；以60 只SD大鼠为受体，30 只Wistar大鼠为供体，碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组和mDC组，每组20 只；对照组：术前7d经尾静脉注射PBS液0.1ml；imDC 组和mDC组分别于术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC和mDC 1×106个。术后每日裂隙灯下观察各组角膜植片存活情况并评分；于术后3d、7d、14d 三个时间点，每组随机处死4只受体大鼠，取角膜植片行HE染色；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测角膜植片Th1 型细胞因子（IL-12、IL-15、IL-18）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）mRNA表达水平；蛋白印迹法（Western blot）分析检测各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T 细胞表面特异性标志转录因子Foxp3 的表达。结果：通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三种细胞因子，培养、诱导、扩增大量的DC，经倒置相差显微镜、扫射电镜的形态学观察、流式细胞仪进行免疫学表型检测，可证实为不同成熟状态下的DC。角膜移植术后，观察角膜植片存活时间，imDC组植片存活时间与对照组、mDC组比较显著延长，差异具有统计学意义（均为P0.05）；RT-PCR检测：imDC组Th1型细胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表达较对照组和mDC组明显降低；Th2 型细胞因子IL-4、IL-10 mRNA表达明显升高；Westernblot检测：各时间点Foxp3表达的相对吸光度值imDC组均明显高于对照组和mDC组，差异有统计学意义（均为P0.05）。结论：通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α 三种细胞因子能培养、诱导、扩增出大量的DC；输注体外培养的供体骨髓来源的imDC可以诱导角膜移植免疫耐受，减轻免疫排斥反应，有效延长移植物的存活时间；imDC 可能主要通过诱导Th1/Th2 细胞偏移和CD4+CD25+调节性T细胞的扩增参与免疫耐受的形成。关键词：未成熟树突状细胞；角膜移植；免疫耐受；Th1/Th2；调节性T细胞论文类型：B（应用研究）AbstractObjective:Toculturetheratbonemarrowderiveddendriticcell(DC)andtostudytheeffectsof differentmaturationstatusofDContheinvivoimmuneresponsetoratorthotopiccorneal transplantationinhigh-riskeyesandinvestigatethemechanismoftheimmunologictolerarceinduced byimmature dendritic cell (imDC)．Methods:Bonemarrow-derivedDCofwistarratswereculturedwithrecombinantrat granulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor(GM-CSF)andInterleukin(IL)-4.ImDCand matureDC(mDC)weregeneratedwithoutorwiththestimulationoftumornecrosisfactor-α (TNF-α),wedefinethedevelopmentalmorphology,andtheirphenotypewereanalyzedby?ow cytometry.60SDrats(recipient)and30Wistarrats(donor)wererandomly dividedinto3groups: control,imDCandmDCgrouprespectively.Usingamodeloforthotopiccornealtransplantation