实验一 玉米花粉母细胞涂抹制片.pptVIP

实验安排 1、玉米花粉母细胞涂抹制片 2、根尖压片 3、大麦染色体的核型分析 4、植物DNA的提取 5 水稻胚的组织培养 玉米花粉母细胞涂抹制片 2010.5.26 玉米花粉母细胞涂抹制片 实验目的 学习和熟悉植物花粉母细胞染色体制片技术。 通过实验加深对植物的减数分裂和植物雄配子体形成过程的认识。 实验材料 玉米杂合易位株正在进行减数分裂中的雄穗。 玉米花粉细胞减数分裂通常发生在雄穗尖端露出前5-10天，但是雄穗仍旧被叶鞘包卷，当包裹处开始变得松软膨大时，花粉母细胞开始减数分裂；除此之外还要考虑雄穗的大小，小花长短和颜色等因素。 玉米是一年生的禾本科植物，雌雄花序同株而异花，交配手续简便，一个果穗可产生大量的种子后代。 变异类型丰富染色体较大，且数目较少 （2n＝20），便于观察。 玉米易于种植管理，取材方便。 小孢子显微结构图 花粉发育过程 减数分裂示意图 实验药品与器具 药品：醋酸洋红， 45％醋酸， 卡诺固定液（95％乙醇冰醋酸=3:1）。 器具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯， 镊子，刀片等。 实验方法与步骤 1.取材 玉米的最后一片叶露出叶尖时，形成大喇叭口的一周前，当喇叭口下部开始出现松软膨大的时候，用刀片破叶取出其中花序检查，材料要求尚未变黄，变黄则其中均为花粉粒，在小而绿的花药中才有处于减数分裂的细胞。 2. 固定 将收集材料去除太老和太嫩的小穗，置于卡诺固定液中24小时保存，固定液的量不少于材料体积的5倍。 如果需要长期保存，可以将材料保存至70％乙醇中存放在冰箱里。 固定作用：迅速杀死材料的活细胞，使染色体核蛋白变形，以保持染色体固有的形态。 3. 制片 用镊子从固定瓶中取出1-2条雄穗分支，选取合适部位的小花，夹出1-2个花药，置于载玻片上，滴加少量醋酸洋红，截断花药，并反复地轻轻挤压花药，使花粉母细胞溢出。 静置染色2-3分钟，去除花药壁残留杂质，置于低倍镜下观察，粗略判断分裂期，若小穗过老，则往下取材，反之则往上取。 材料合适后盖上盖玻片，使染液刚好布满载玻片与盖玻片之间成一薄层 。 用滤纸吸去盖片周围染料，然后在酒精灯下轻微加热，以利于进一步着色和染色体分散，在盖玻片上覆以吸水纸用拇指适当加压。 若细胞质染色过深，可以在盖片一侧添加45％醋酸，另一侧用滤纸吸，减轻细胞质染色。 有两点需要注意： 1、盖上盖玻片后，不要再次移动盖玻片。 2、加热时要均匀受热，勿使染料沸腾。 4. 镜检 查找花粉母细胞减数分裂各时期的分列相。 制片流程图 选取合适小花 取出花药，滴加染液，挤出花粉 压片后，酒精灯微微烘烤 显微镜下镜检 细 线 期 偶 线 期 粗 线 期 终 变 期 减数分裂 前期Ⅰ 减 数 分 裂 中 期 Ⅰ 减 数 分 裂 后 期 Ⅰ 减数分裂后期Ⅰ 实验报告 画出显微镜下观察到的染色体状态，每人需画出两个不同时期花粉母细胞的染色体。 思考题：简要说明减数分裂和有丝 分裂的区别和联系。 减数分裂 前期Ⅰ［细线期和终变期—较大的核仁存在］ 玉米花粉母细胞染色体的减数分裂 减数分裂 末期Ⅰ 减数分裂 前期Ⅱ 减数分裂 前期Ⅱ和中期Ⅱ 　　　　　 　花粉母细胞呈现二分体形式，不同之处为核内　染色体状态不一样，散乱/赤道板处整齐排列． 减数分裂 后期Ⅱ 　分别在两个细胞内的着丝粒分裂，染色单体移向两极． 减数分裂 末期Ⅱ 　细胞呈现为四分体形式，又称为四分孢子，每一个细胞进一步发育为成熟花粉粒． * 粗线期图示: 为粗线期和双线期的混合期，可以看到染色体开始了交叉现象． * 粗线期图示: 为粗线期和双线期的混合期，可以看到染色体开始了交叉现象．