exendin4对il1β诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用及相关机制的研究word格式论文.docxVIP

目录一、缩略词表…………………………………………………………………………4 二、中文摘要…………………………………………………………………………5 三、英文摘要…………………………………………………………………………7 四、前言………………………………………………………………………………9 五、第一部分：IL-1β诱导小鼠胰岛β细胞凋亡模型的建立及其可能的机制…12引言…………………………………………………………………………… 12材料和方法…………………………………………………………………… 12结果…………………………………………………………………………… 20讨论…………………………………………………………………………… 27小结…………………………………………………………………………… 29六、第二部分：Exendin-4对IL-1β诱导的小鼠胰岛β细胞凋亡的保护作用及可能的机制…………………………………………………………………… 31引言…………………………………………………………………………… 31材料和方法…………………………………………………………………… 32结果…………………………………………………………………………… 33讨论…………………………………………………………………………… 36小结…………………………………………………………………………… 37结论…………………………………………………………………………… 38七、参考文献……………………………………………………………………… 39八、致谢…………………………………………………………………………… 43九、综述…………………………………………………………………………… 443缩略词表（Abbreviationsandacronyms）BSA,Bovineserumalbumin,牛血清白蛋白DMEM,Dulbecco’smodifiedEagel’smedium,DMEM培养基DMSO,dimethyl sulfoxide,二甲基亚砜FBS,fetalbovineserum,胎牛血清GLP-1,Glucagon-likepeptide-1,胰高血糖素样肽-1 IL-1β,interleukin-1β,白介素1βiNOS,，induciblenitricoxidesynthase，诱导性一氧化氮合酶L-NAME,NG-Nitro-L-arginineMethylEster，左旋硝基精氨酸甲酯MTT,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,噻唑蓝NAC,N-Acetyl-L-cysteine，N-乙酰半胱氨酸PBS,phosphatebufferedsaline,磷酸盐缓冲液PDTC,pyrrolidinedithiocarbamate，四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯ROS，reactiveoxygenspecies，活性氧物质RNS，reactivenitrogenspecies，活性氮物质TNF-α,tumornecrosisfactor-α,肿瘤坏死因子-α4Exendin-4对IL-1β诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用及相关机制的研究摘要目的：探讨GLP-1 受体激动剂Exendin-4 对细胞因子IL-1β诱导的小鼠胰岛 β细胞株MIN6 细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。方法：体外培养小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞，用不同浓度（5-40ng/ml）IL-1β作用24小时，通过噻唑兰还原（MTT）法观察不同浓度IL-1β作用后各实验组细胞的增殖率；用Hoechst-PI荧光染色法观测各组细胞凋亡形态，Annexin-Ⅴ-PI染色流式细胞技术测定各组细胞凋亡率，用Griess法检测各实验组细胞内一氧化氮（NO）水平，WesternBlot方法测定诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白及核因子-κB片段p65（NF-κBp65）蛋白表达水平。之后，应用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）、NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）及iNOS抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）预处理并检测以上各项指标；随后用Exendin-4（100nmol/L）预处理细胞，观察Exendin-4对IL-1β诱导的MIN6细胞凋亡的保护作用，并深入探讨Exendin-4对IL-1β诱导MIN6 细胞凋亡的保护作用是否通过抑制NF-κB-iNOS-NO信号通路而实现。结果：MTT显示IL-1β（5-40ng/ml）作用24小时后，MIN6 细胞的增殖率明显下降，并呈现一定的量效关系；Hoechst-PI染色荧光显微镜及Annexin-Ⅴ-PI 双染流式细胞检测证实随着IL-1β浓度的