fersirna转染对膀胱癌细胞株t24生物学特性的影响及分子机制的初步分析word格式论文.docx

目录中英文缩略词2中文摘要3英文摘要5引言8第一部分膀胱癌中Fer的表达及其临床意义11材料与设备11实验方法12实验结果20讨论23第二部分Fer siRNA对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响25材料与设备25实验方法25实验结果27讨论30第三部分Fer siRNA对膀胱癌细胞的MAPK/AP-1信号通路的影响33材料与设备33实验方法33实验结果33讨论35第四部分结论34参考文献39附录43致谢44综述451中英文缩略词英文缩写英文全称中文全称siRNAsmallinterferingRNA小干扰RNAFerFelinesarcoma-relatedprotein猫肉瘤相关蛋白GAPDHglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase甘油醛-3-磷酸脱氢酶IHCImmunohistochemitry免疫组织化学HEhemataoxylinandeosin苏木精-伊红S-PStreptavidin-peroxidas链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜FBSFetalbovine serum胎牛血清BSAAlbuminfrombovineserum牛血清白蛋白MTTMethylthiazolyltetrazolium四甲基偶氮唑盐PBSphosphate bufferedsaline磷酸盐缓冲液TBSTrisbufferedsalineTris 缓冲盐液TBSTTrisbufferedsaline containingTween20TEMEDN,N,N,N-Tetramethylethyl enediamineMAPK/AP-1Mitogenactivatedproteinkinases/Activatorprotein-1含Tween20 的Tris 缓盐液N,N,N,N-四甲基乙二胺丝裂原活化蛋白激酶/激活蛋白-12Fer-siRNA转染对膀胱癌细胞株T24生物学特性的影响及分子机制的初步研究摘要[背景和目的]膀胱癌是我国男性发生率最高的泌尿系统恶性肿瘤，2012年，大约73510个新病例被确诊，并导致约14880人死亡。由于膀胱癌具有复发性和远处转移性等特点，其发生发展的确切机制不明确，故治疗效果往往并不理想。因此，我们必须要了解膀胱癌的生物学特性，寻找可行的生物学标志物并探讨研究其治疗的靶点。猫肉瘤相关蛋白（Felinesarcoma-relatedprotein，Fer）是在人类的细胞核及细胞质中广泛表达的一种非受体酪氨酸蛋白激酶，Fer基因已被报道在多种恶性肿瘤中呈高表达，并与肿瘤细胞生物学特性相关，如细胞增殖、迁移及侵袭作用，而且可以通过某些生长因子受体来调节细胞信号的传导。然而，没有任何文献报道Fer表达与膀胱癌病理学特征的关系及其分子机制。丝裂原活化蛋白激酶/激活蛋白-1（MAPK/AP-1)信号通路是经典的细胞信号转导途径,具有调节细胞增殖、分化、存活、转化及凋亡等多重功能,与膀胱癌的发生、发展、侵润、转移及预后等相关密切。本实验研究中，首先明确了Fer基因在膀胱癌中呈高表达状态，再利用RNAi技术沉默膀胱癌T24细胞中的Fer基因，进而研究Fer基因对T24细胞株的增殖、周期、迁移及侵袭等生物学特性的影响以及MAPK/AP-1信号通路相关分子的变化，为临床治疗膀胱癌提供了新的途径并奠定了一定的理论基础。[方法]运用Western blot、qRT-PCR及免疫组化技术检测膀胱癌细胞水平和组织水平Fer的表达，化学合成针对Fer的小干扰RNA, 通过质脂体转染法转染进膀胱癌T24细胞中，利用qRT-PCR及Western blot 技术检测细胞中Fer在RNAi前后的变化，然后用MTT法、流式细胞技术、细胞划痕实验及transwell实验观察RNAi 前后膀胱癌细胞在增殖、周期、迁移和侵袭能力方面的变化,进一步用qRT-PCR及Western blot方法检测RNAi前后MAPK/AP-1信号通路有关分子的变化。3[结果]与正常膀胱组织及细胞相比，膀胱癌组织和癌细胞中Fer均呈高表达状态，其表达水平与肿瘤分期、组织学分级以及淋巴结状态等有相关性（P0.05）。特异性siRNA 可显著抑制T24细胞Fer的表达，MTT实验揭示RNA干扰(Si)组细胞在24、48、72h增殖抑制率分别为22.9％、24.4％和42.5％，较空白组及阴性对照组细胞增殖明显抑制(P0.05)；流式细胞仪揭示RNA干扰(Si)组细胞G0/G1和S 期细胞比例分别为(52.34±2.049)%和(35.04±3.810)%,均与空白组及阴性对照（Nc）组比较有统计学意义(P0.05)；siRNA组细胞的迁移及侵袭能力同样较空白组及阴性对照组明显降低。同