fibulin5对mcao再灌注大鼠血脑屏障和轴突再生的影响及机制探讨word格式论文.docx

附图101文献综述109致谢119博士期间撰写及发表的论文120英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称Adadenovirus腺病毒AKTproteinkinaseB蛋白激酶BANOVAanalysisofvariance方差分析BBBblood-brainbarrier血脑屏障BDAbiotinylateddextran amine生物素葡聚糖胺CNScentralnervoussystem中枢神经系统CRMP-2collapsinresponsemediatorprotein-2脑衰反应蛋白-2 EBevans’blue伊文思蓝ECAexternal carotid artery颈外动脉ECMextracelluarmatrix细胞外基质GFPgreen fluorescentprotein绿色荧光蛋白GSK-3βglycogensynthase-3β糖原合成酶-3βI/Rischemia/reperfusion缺血再灌注ICAinternal carotid artery颈内动脉MCAOmiddlecerebral arteryocclusion大脑中动脉闭塞MMP-9matrixmetalloproteinases-9基质金属蛋白酶-9NADPHnicotinamideadeninedinucleotidephosphate还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NVUneurovascular unit神经血管单元PBSphosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液PFAparaformaldehyde多聚甲醛PVDFpolyvinylidinedifluoride聚偏二氟乙烯膜ROSreactiveoxygenspecies活性氧SDsprague dawleySD大鼠TBSTtrisbufferedsaline withtween洗膜缓冲液1Fibulin-5对MCAO/再灌注大鼠血脑屏障和轴突再生的影响及机制探讨摘要背景与目的：缺血性脑血管病是人类健康的重要危害，急性脑梗死后血脑屏障（bloodbrainbarrier,BBB）开放使得病程早期即造成脑水肿，而随着病程进展，血脑屏障的持续开放将使得脑水肿加重，并增加出血转化的风险，因此，卒中早期的治疗重点是减轻血脑屏障的渗出。然而，脑卒中的治疗方法仍然相当有限，急性期的动静脉溶栓治疗是唯一认可的有效措施，但其严格的时间窗限制约束了很多卒中患者在急性期得到有效的治疗，因此遗留不同程度的残疾。相对于急性期的治疗，促进轴突再生是恢复期患者的治疗重点。“神经血管单元”（neurovascular unit,NVU）理念使得卒中研究者不仅仅关注于血管内皮细胞、神经元等热点研究对象，同时重视了细胞外基质（extracellular matrix, ECM）等周围组织。细胞外基质在结构上支撑内皮细胞、外周细胞及胶质细胞等，功能上还参与一些信号传导通路，在神经血管单元中起到纽带连接的作用。Fibulin-5是细胞外基质中的重要成员，通过与整合素受体的结合增强内皮细胞与ECM的粘附，同时，垂直方向的粘附增强促进水平位内皮细胞间紧密连接蛋白（tightjunction,TJ）的表达，从两个方面维护BBB的完整性。此外，Fibulin-5通过竞争纤维国家自然科学基金资助项目2连接蛋白与内皮细胞表面的整合素受体α5β1 的结合而达到抑制整合素信号通路传导的作用，从而减少活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）产生。脑缺血后大量产生的ROS可以直接引起内皮细胞凋亡，激活基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases, MMPs），减少TJ表达，促进BBB的渗出，因此过表达的Fibulin-5存在保护BBB的作用。ROS 还具有第二信使分子的作用，过表达Fibulin-5对ROS产生的调节还可以启动GSK-3β/CRMP-2通路，对其进行磷酸化修饰从而改变其活性状态。然而GSK-3β/CRMP-2通路与轴突再生密切相关，促进神经元微管的装配以及轴突的延伸，因此，Fibulin-5是一种多功能分子，下调脑缺血再灌注后的ROS，不仅保护血脑屏障的完整性，同时还可能参与轴突再生的信号通路。整合素信号通路诱导的ROS产生得助于活性的Rac-1参与，故Fibulin-5参与的调控ROS 机制需要进一步深入探索。同时，Fibulin-5还能与胞外超氧化物歧化酶（extracellularsuperoxide dismutase,eSOD）结合，介导细胞外ROS 的降解。综合来看，Fibulin-5 从ROS的来源和清除两方面调控其产生，具有明确的抗氧化应激作用，因此本实验采用转染Ad-FBLN 的MCAO/再灌注大鼠实验模型，研究过表达F