基于肠道菌群失调并过敏性哮喘大鼠tlrsnf-κb信号转导通路及肠道菌群16srdna的“肺与大肠相表里”免疫机制研究-study on the immune mechanism of.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 中文摘要 目的：1.构建肠道菌群失调合并过敏性哮喘大鼠模型；2.初步探索肠道菌群 失调合并过敏性哮喘模型中肺、肠免疫与肠道菌群的关系及作用机制；3.分别从 肺肠合治、治肺法和治肠法三个方面治疗肠道菌群失调合并过敏性哮喘大鼠，以 比较、验证治肺法、治肠法与肺肠合治法对模型大鼠的有效性，进一步探索和验 证肠道微生态和肺、肠免疫调节的关系与机制，为中医理论“肺与大肠相表里” 的临床应用提供实验依据。 方法： 1.予 SD 大鼠饮用头孢哌酮水溶液和灌胃白色念珠菌造成大鼠肠道菌群紊 乱，再利用皮下注射和雾化吸入卵清蛋白的方式构建肠道菌群失调合并过敏性哮 喘模型。分别从个体、组织细胞、分子水平评价模型的有效性； 2.通过分析肠道菌群 16SrDNA 以及 TLRs/NF-κB 信号转导通路中 TOLL 样 受体 2（TOLL-like receptors2，TLR2）、TLR4、MyD88、TARF6 和β-arrestin mRNA 在肺和肠组织的表达水平，并进行相关性分析，探索肠道菌群失调合并过敏性哮 喘肺部免疫与肠道免疫的关系及作用机制； 3.以“升降散”、“桂枝加厚朴杏子汤”和“增液承气汤”灌胃模型大鼠，从 个体、细胞和分子水平进行检测分析，以比较、验证治肺法、治肠法与肺肠合治 法对模型大鼠的有效性，进一步探索和验证肠道微生态和肺部免疫调节的关系与 作用机制，为中医理论“肺与大肠相表里”的临床应用提供实验依据。 结果： 1.肠道菌群失调合并过敏性哮喘模型的构建及有效性评价 模型组大鼠跟空白组比较，呼吸频率显著上升，肺泡灌洗液（BALF）和 血液中嗜酸性粒细胞以及血液中淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞的数量均显著 升高，肺组织切片出现明显的病理学改变，血液中 IgE 显著升高，sIgA 显著降 低，各种改变均具有统计学差异，说明模型组发生了典型的哮喘相关的病理学改 变；模型组 BALF 中 IL-4 和 IFN-γ的含量跟空白组比较均发生了显著性改变， 具体表现为 IL-4 升高，IFN-γ降低，肺组织中 GATA-3 mRNA 的表达水平显著性 高于空白组，均具有统计学差异，说明模型组大鼠出现了以 Th2 增多为主的 Th1/Th2 失衡。 I  2.肺、肠道免疫与肠道菌群机制研究 模型组肠道菌群多样性比空白组明显降低，肠道正常菌群拟杆菌门和变形菌 们减少，同时有害菌群梭状芽孢杆菌和幽门螺旋杆菌增加，阳性组肠道菌群多样 性逐渐恢复。模型组的肺组织中 TLR4 与 MyD88、TRAF6、β-arrestin mRNA 表 达量比空白组和阳性组均显著性升高（P0.05），除了 TRAF6 mRNA 其余三个 mRNA 变化呈正相关性；模型组的肠组织中 TLR4 与 MyD88、TRAF6、β-arrestin mRNA 表达量均高于空白组和阳性组，但只有 TLR4 mRNA 表达量具有统计学 意义，同时 MyD88、TRAF6 和 β-arrestin 的 mRNA 表达量呈正相关性。 3.三种治法对模型动物影响的比较 “加味升降散”对模型大鼠无论在呼吸频率、气道高反应性、肺组织病理切 片分析、BALF 中嗜酸性粒细胞数目以及 IgE 的变化，以及 T-bet/GATA-3 和 IFN-γ、 IL-4 含量变化均具有最佳的调节作用，且都与模型组差异显著（P0.05），对肠 道菌群多样性具有恢复作用但是不如治肠组；“增液承气汤”对肠道菌群多样性 的恢复效果最佳，对气道高反应性、BALF 中白细胞总数和嗜酸性细胞数量以及 血液中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量均有很好的调节作用（P0.05）；“桂枝加 厚朴杏子汤”对肠道菌群多样性的恢复不如治肠组，对模型动物呼吸频率的改善 和调节血液中嗜酸性粒细胞都有明显的优势，还能有效地升高 Th1 分化细胞特 有的细转录因子 T-bet mRNA 的表达量（P0.05）。各治疗组肺组织中 TLR2、 MyD88 和 TRAF6 mRNA 的表达水平均显著性地低于模型组（P0.05），只有治 肺组和肺肠合治组肺组织的 TLR4 和β-arrestin mRNA 的表达量均低于模型组且 具有统计学意义；各治疗组肠组织中 TLR2、MyD88 和 TRAF6 mRNA 的表达水 平均高于模型组，但只有 TLR2 在肺肠合治组和治肺组以及 TRAF6 在治肺组和 治肠组差异具有统计学意义；只有治肠组的β-arrestin mRNA 的表达量高于模型 组且具有统计学意义。 结论： 1.通过灌胃大鼠头孢哌酮和白色念珠菌，利用卵清蛋白进行致敏和雾化， 成功构建了肠道菌群失调合并过敏性哮喘模型； 2．过敏性哮喘合并肠道菌群失调大鼠模型中，依赖于 MyD88 的 TLRs/NF-κB 信