卵巢上皮性肿瘤DNA倍体分析及 P53 表达意义.docVIP

卵巢上皮性肿瘤DNA倍体分析及 P53 表达意义 【摘要】目的：观察卵巢上皮性肿瘤(EOT)患者核DNA含量、P53蛋白表达情况,研究其与生物学行为之间的关系及临床鉴别诊断的意义。方法：采用流式细胞术对162例卵巢上皮性肿瘤(EOT)石蜡包埋组织进行肿瘤单细胞DNA倍体分析；同时,采用流式细胞术对P53蛋白表达进行检测。结果：53例良性肿瘤DNA倍体检测均为二倍体；43例交界性中检出异倍体11例,二者有显著差异。恶性EOT与交界性EOT和良性EOT比较均有显著差义。P53阳性表达恶性EOT与交界性EOT和良性EOT比较均有显著差义。显著高于后二者(X2=34.719,P＜0.001)。结论：P53阳性表达与DNA异倍体密切相关,可能是肿瘤发生的机制之一。 【关键词】 卵巢上皮性肿瘤DNA倍体分析流式细胞术基因P53　Abstract Purpose:To observe the nuclear DNA contents and P53 expression of the patients with epithelial oarian tumors (EOT) and to study the biological behaviors and the clinical significance of the differential diagnosis.Methods:Tumor single-celled DNA ploidy were analyzed by flow cytometry for 162 paraffin specimens of EOT,as well as the expression level of P53.Results:DNA ploidy of 53 cases with benign tumor were diploid.11 cases of heteroploid were detected in 43 specimens of borderline tumor.There were significant differences between aforementioned groups.Malignant EOT compared with borderline EOT and benign EOT were significant different,as well as the positivity of P53.Conclusions:The positive expression of P53 and DNA heteroploid are closely related,and might be one of the mechanisms of oncogenesis. Key Words epithelial ovarian tumor;DNA ploidy analysis;flow cytometry;gene;P53 卵巢来源的良、恶性肿瘤是临床常见肿瘤，以组织细胞学形态为主要根据判断其良、恶性有时相当困难。本研究采用流式细胞术对良、恶性卵巢肿瘤进行DNA倍体检测分析，同时佐以免疫组化法检测P53表达，以探讨其与组织细胞学形态的关系和对临床鉴别诊断的意义。 资料与方法 2003～2009年确诊为卵巢肿瘤的石蜡包埋组织标本162例，年龄35～68岁，平均48±12岁。162例EOT中，卵巢浆液性肿瘤77例，其中良性囊腺瘤21例，交界性囊腺瘤24例，浆液性囊腺癌32例；卵巢黏液性肿瘤85例，其中良性囊腺瘤32例，交界性囊腺瘤19例，黏液性囊腺癌34例。所用组织学标本均为石蜡包埋病理组织。 流式细胞术：①石蜡包埋组织的单细胞悬液的制备：50mu;m厚的石蜡包埋组织连续切片5张，经二甲苯脱蜡48小时；体积分数1.00、0.95、0.70、0.50的梯度乙醇水化；加入3ml胶原酶消化液，置37℃恒温水浴中作用消化30分钟；尼龙网过滤，收集细胞悬液，1500转/分钟离心沉淀；PBS液漂洗，1000转/分钟离心沉淀。全部病例均制备细胞悬液涂片，保证镜下观察保留完整的细胞核；再行核酸染料标记DNA(DNA倍体分析试剂，BECKMAN COULTER公司)；30分钟后上流式细胞仪进行检测分析，获得细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。②DNA倍体分析：采用细胞周期和DNA分析软件(MultiCycle AV for Windows advancedDNA Cell Cycle Analysis Sof tware)进行各项指标的分析。DNA指数(DI)在1.0±2CV之间(0.90～1.10)为二倍体，不在1.0±2CV之间为异倍体。 免疫组化检测：