卵巢子宫内膜异位症异位和在位内膜组织中孕激素受体亚型的表达及意义.docVIP

卵巢子宫内膜异位症异位和在位内膜组织中孕激素受体亚型的表达及意义 【摘要】目的研究子宫内膜异位症组织中孕激素受体亚型的表达，探讨其在内膜异位症发生、发展和治疗中的意义。方法选取2005年1~5月山东大学齐鲁医院妇产科22例卵巢子宫内膜异位囊肿的囊壁组织，6例同时行子宫切除术患者的在位内膜组织和13例正常内膜组织，采用RT-PCR技术对孕激素受体(PR-A+B)和孕激素受体B亚型(PR-B)的基因表达进行半定量研究。结果巧克力囊肿组织中PR-A+B和PR-B mRNA表达显著低于正常内膜组织和子宫内膜异位症(EM)患者在位内膜组织(P0．01)；巧克力囊肿组织中PR-B／PR-A+B mRNA的比值低于正常子宫内膜组织PR-B／PR。A+B mRNA的比值，差异有显著性(P0．01)。结论PR-A+B和PR-B／PR-A+B mRNA的比值降低可能与EM发生、发展及治疗中“孕激素耐受”相关。 【关键词】 卵巢子宫内膜异位症受体孕酮 子宫内膜异位症(endometriosis，EM)的治疗是非常棘手的问题。虽然孕激素类药物能缓解EM症状，但常见孕激素抵抗而影响其疗效。孕激素通过与靶细胞上的受体(receptor)结合发挥生物学作用，细胞核中存在分子质量不同的孕激素受体亚型：PR-A和PR-B。本实验采用RT-PCR技术检测卵巢巧克力囊肿患者异位和在位内膜以及正常子宫内膜组织中两种孕激素受体亚型的基因表达(PR-A mR-NA、PR-B mRNA)，探讨孕激素受体亚型在于宫内膜异位症发病中的作用，为临床治疗的药物选择提供理论依据。 1 资料与方法 1．1 资料来源 选取2005年1~5月山东大学齐鲁医院经腹或腹腔镜下卵巢子宫内膜异位囊肿剥除的患者22例(其中6例为卵巢子宫内膜异位囊肿合并子宫腺肌病，同时行子宫切除术)为研究组，其中增生期10例，分泌期12例；年龄平均35岁(27~50岁)。选取同期来院进行健康查体或不明原因不孕患者13例作为对照组，增生期5例，分泌期8例；年龄平均33岁(24~46岁)。所有入选病例入院前3个月内均未服用激素类药物；未患子宫内膜肿瘤、卵巢恶性肿瘤、功能失调性子宫出血及乳腺肿瘤等与激素水平密切相关的疾病。研究组于手术切除30min内取巧克力囊肿壁，合并子宫腺肌病行子宫切除术者同时取其在位于宫内膜；对照组于官腔镜检查时取少许子宫内膜，立即放入冰盒中并于10min内转移至-80℃冰箱中保存备用。所有组织标本都经病理证实为卵巢子宫内膜异位囊肿或正常内膜。 1．2 研究方法 1.2.1 组织总RNA提取 用1%DEPC水溶液浸泡所有一次性实验器材，按照TrizoL试剂使用说明，采用一步法提取组织总RNA，立即使用或-80℃保存备用。紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度。 1.2.2 逆转录 按照试剂盒说明进行逆转录合成cDNA，反应体系如下：RNA l L(0.5g)、5times;buffer4L、DTT2L、4xdNTP2L、OLigodT18 L、M-MLV逆转录酶1L、DEPC处理水10L(共20L)；反应条件为37℃ 60min、95℃ 5min、4℃冷却后进行PCR反应或-20℃保存备用。 1.2.3 PCR扩增 反应体系共20L，包括10times;buffer 2L、25Mm Mgcl2 1.6L、4times;dNTP 0.4L、Taq酶0.4L、上下游引物各1L、cDNA0.8L、超纯水12.8L；反应条件为:95℃预变性5min后，按下述循环进行PCR扩增：94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，扩增35个循环，72℃延伸7min。引物设计：由于PR-A和PR-B由同一基因编码，两者的区别在于PR-B的N.末端较PR-A多164个氨基酸，PR-A没有自己独特的基因序列，根据两者共同序列设计引物，即PR-A+B(上游5prime;-TGGAAGAAAT-GACTGCATCG。3rsquo;下游5prime;-TAGGGCTTGGCTTTCATITG-3rsquo;)；根据PR-B特有序列设计引物，即PR-B(上游5prime;-ACACCTTGCCTGAAGTITCG-3prime;下游5prime;-CTGTCCTITrCT-GGGGGACT-3prime;)，两者扩增片段长度均为196 bp1。以beta;-actin作为内参照，上游引物5prime;-AGCGAGCATC-CCCCAAAGTT-5prime;下游引物5prime;GGGCACGAAGGCTCAT-CATT-3prime;，扩增片段长度为285 bP。 1.2.4 凝胶电泳 取扩增产物(PR-A+B或PR-B)5L，与5L-actin产物及l L 6xbuffer(上样缓冲液)混合均匀后于1.8％的琼脂糖凝