胎兔与成兔皮肤瘢痕基因差异表达的分析.docVIP

胎兔与成兔皮肤瘢痕基因差异表达的分析 作者：吴志远,孙雪峰,罗少军,江黎明 单位：524001 广东省湛江市，广东医学院附属医院整形外科研究所(吴志远、罗少军、江黎明)；河北北方学院附属第二医院(孙雪峰) 【摘要】 目的 探讨胎兔及成兔皮肤瘢痕基因表达变化的特征及其可能的生物学意义。方法 建立动物模型，收集胎兔及成兔皮肤愈合处的皮肤组织，用基因芯片技术检测胎兔及成兔皮肤瘢痕的基因表达变化规律。结果 基因芯片高通量地揭示了胎兔及成兔皮肤瘢痕的基因表达变化的信息，差异表达基因有117个，其中下调的基因有28个，上调的基因有89个，涉及十大类基因。结论 胎兔及成兔皮肤瘢痕的基因图谱存在差别，这些基因可能参与了瘢痕的形成过程。 【关键词】 皮肤 基因芯片 基因表达 Analysis of expressed genes in fetal rabbit skin and the scar of adult rabbit WU Zhiyuan，SUN Xuefeng，LUO Shaojun，et al.  Guangdong Medical College, Guangdong, Zhanjiang 524001 【Abstract】 Objective To analyse the changes of genes and their biologic significance that occurred in fetal rabbits skin and the scar of adult rabbits.Methods The animal model was established, and the samples were obtained from the fetal rabbits skin and the scar of adult rabbits,and rules of expressed genes in all the samples were detected by using gene chip.Results Gene chip disclosed a large scale of information in current stduy. 117 different genes in fetal rabbits skin and the scar of adult rabbit were found, in which 28 were downregulated and 89 were upregulated.Conclusion There are differences of gene expression between fetal rabbits skin and the scar of adult rabbits by using gene chip analysis, and maybe these genes are involved in the development of scar in rabbits. 【Key words】 rabbits; scare; gene chip; gene expression 目前对皮肤的认识已深入到分子领域，寻找皮肤瘢痕形成过程中的相关特异性基因已显得十分必要。本实验通过基因芯片技术研究胎兔及成兔皮肤瘢痕基因表达变化的待征，探寻皮肤瘢痕形成过程中的基因表达规律，实现基因水平调控皮肤创伤修复和组织再生及瘢痕形成中得到直接的预防和干预手段。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源及收集 　　建立动物模型，取孕22 d的成兔3只，在麻醉下暴露孕兔背部，切取面积为2 cmtimes;1 cm的全层皮肤，予以原位缝合，然后将孕兔行剖腹术，按同样方法，取一只胎兔行手术。继续饲养8 d，取原孕30 d的成兔，切取原手术处皮肤及瘢痕组织，共获3组标本，多聚甲醛固定，包埋切片备用。 　　1.2 总RNA抽提和测定 　　按Chomczynski等［1］提出的一步法，分别抽提胎兔皮肤组织和成兔瘢痕组织的总RNA，用Licd沉淀法纯化后紫外分析及电泳检测显示获得了高质量的纯净总RNA。 　　1.3 mRNA分离纯化 　　按照Oligotex mRNA spincolumn protocol［2］分离纯化mRNA，紫外分析其质量。 　　1.4 芯片制备 　　美国SuperArray公司提供含14784基因芯片。用通用引物进行PCR扩增，PCR引物长度为13 000 bp，靶基因以0.5 mu;g/mu;l在硅烷化玻片上点样，点样后玻片凉干备用。 　　1.5 表达谱探针制备 　　参照Schena［2］方法标记cDNA探针并纯化，用Cy3dTUP标记胎