hbx通过egr1上调mpges1表达在促肝细胞炎性反应中的作用-role of hbx in promoting hepatocyte inflammatory response by up-regulating mpge s1 expression by eg r1.docxVIP

目录英文缩略词表 错误!未定义书签。中文摘要 错误!未定义书签。英文摘要 错误!未定义书签。前言 错误!未定义书签。材料与试剂 错误!未定义书签。 实验方法 11结果 38讨论 49结论 52参考文献 53综述 59参考文献 65致谢 68在学期间论文发表情况 69缩略语HBVHBx英文缩略词表英文全称Hepatitis b virusHepatitis b virus X protein中文全称 乙肝病毒 乙肝病毒 X 蛋白PGE2 PGD2 PGI2 COX-1Prostaglandin E2 Prostaglandin D2 Prostaglandin I2 Cyclooxygenase 1前列腺素 E2前列腺素 D2 前列腺素 I2 环氧化酶 1COX-2Cyclooxygenase 2环氧化酶 2mPGES-1Membrane type combined with膜结合型前列腺素 E2 合prostaglandin E2 synthase1酶 1PCRPolymerase chain reaction聚合酶链式反应TxA2Thromboxane A2血栓烷 A2EMSAElectrophoretic Mobility Shift Assay凝胶迁移阻滞实验CHIPChromatin Immunoprecipitation染色质免疫共沉淀EGR1Early Growth Response 1早期生长应答因子AP-1Activated protein 1活化蛋白 1AP-2Activated protein 2活化蛋白 2SP1Sequence specific protein transcription序列特异性转录蛋白 11NF-κBNuclear factor kappa B predominate核因子 κBcAMPCyclic amp环腺苷酸AKTSerine/threonine protein kinase丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶JAKJanus Kinase激酶STATSignal transducer and activator of转录激活因子transcriptionMAPKMitogen-activated protein kinase丝裂原激活的蛋白激酶/MAP 激酶SAPKStress Activated Protein Kinase应激活化蛋白激酶1JNKC - jun amino terminal kinasec-jun 氨基末端激酶AAArachidonic acid花生四烯酸TCF4LEF1T-cell factor 4(lymphoid enhancer factor 1T 细胞因子 4淋巴增强因子 12HBx 通过 EGR1 上调 mPGES-1 表达在促肝细胞炎性反应中的作用目的：乙肝病毒（HBV）的 X 基因表达产物 X 蛋白（HBx）在肝脏炎性进展过 程中发挥多方面的功能，包括调节信号转导、细胞周期、细胞生长和凋亡，细胞 的侵袭和转移等。许多肿瘤细胞在体内外均能使前列腺素类物质尤其是前列腺素 E2（PGE2）合成增加，而过度增高的 PGE2 具有促进肿瘤细胞增殖、迁移，以及 抑制肿瘤细胞凋亡和宿主免疫功能的能力。近年来关于 COX-2 调节通路的研究 也越来越多，COX-2 特异性抑制剂的使用也越来越多，但是抑制 COX-2 也影响 COX-2 通路上其它产物的合成，如 PGI2 和 TxA2 是天然的抗凝血物，而血栓素 TxA2 具有血管收缩和血小板聚集作用。选择性的抑制 COX-2 会改变这两种介质 的比率，向 TxA2 倾斜，导致血管疾病的发生，如突发性心肌梗塞和血栓形成。 最新研究显示 DMC 可以通过下调 mPGES-1 启动子活性而有效抑制 mPGES-1 的 表达，同时即使其在高浓度时也无 COX 酶的抑制活性，表明它是比 COX-2 抑制 剂更好的化合物，有望开发成治疗炎症和癌症的药物，针对 mPGES-1 的研究已 成为最近几年来的热点问题。方法：Western blot 和 qRT-PCR 检测 mPGES-1 在表达 HBx 蛋白的 HL7702-HBx 细胞株和不表达 HBx 蛋白的 HL7702 细胞株中 RNA 及蛋白表达情况；构建 mPGES-1 启动子不同长度的短截荧光报告基因及运用基因定点突变技术构建突 变型 mPGES-1 启动子荧光报告基因探寻 HBx 影响转录的启动子区域；凝胶迁移 阻滞实验（EMSA）和染色质免疫共沉淀（ChIP）验证 HBx 通过 EGR1 影响 mPGES-1 启动子转录活性；构建该 EGR1 的真核表达载体以及运用 RNA 干扰技 术探讨该转录因子 EGR